女性泌尿生殖道解脲支原体基因分型的研究_解脲支原体怎么感染的
时间：2020-02-23 09:33:10 来源：柠檬阅读网 本文已影响 人 
解脲支原体( ureap lasma urealyticum, UU)是引起泌尿生
殖道炎症(NGU)及男女不孕不育的主要病原体,也是性传播
的常见病原体。目前临床中常见对宫颈分泌物检测出解脲支
原体的妇女投以大量抗生素,结果是解脲支原体反复出现阳
性,称之为“解脲支原体耐药”,因此下生殖道内查到解脲支
原体者,是否皆须诊治,一直尚未完全定论。现在对特定血清
型的UU具有致病性,这种条件致病病原体进一步分群分型
是判断感染与携带的关键。故解脲支原体的基因分型研究成为国内外研究热点,现将其研究进展综述如下:
1解脲支原体概述
UU是从人体中分离的能自身繁殖的13种支原体之一,
属硬壁菌门柔膜体纲支原体目支原体科脲原体属。1954年
由Shepard首先从非淋球菌性NGU患者的尿道中分离出来,
称为T株( tiny strain) 。UU介于病毒和细菌之间,是在人工
培养基上能繁殖的最小的原核细胞型微生物,无细胞壁,能自
我复制, 呈球杆状, 大小为125 ～ 250 毫微米, 分子量
4. 5 ×108 ,具高度多形性,是人类泌尿生殖道的一种常见寄生
微生物。1992年Kong认为UU具有保守的氨基末端和具有
多重重复基因的羧基末端,UU的重复顺序短( < 10氨基酸)
但是数目众多。UU 的MBA 抗原(multip le2banded antigen
genes,多带抗原)决定簇模拟了人类蛋白质来避免被识别,
UU的MBA抗原在支原体和宿主的关系中起了关键作用。
MBA抗原有如下特征: ①是被感染病人中认识的最主要抗
原; ②具有种特有性; ③具有型特异性及交叉活性片段,能被
型特异性单抗及交叉活性单抗所识别; ④不但产生于体内,也
产生于体外; ⑤负责解脲支原体某一型的高变异型; ⑥在侵袭
性解脲支原体分离物中存在,并具有表达大小的差异。UU
在遗传学上是“节俭”的而毒力较小的,利用宿主排泄废物
(尿素)的能力使其能够在宿主体内保持高水平的生物种
群[ 1 ]。特异性抗体能抑制UU生长,因其缺乏坚硬的细胞膜,
对青霉素耐药,对细胞膜有亲和性,生长繁殖时需要类固醇物
质。
2解脲支原体的致病机理
UU致病机理是: ①具有致病性的UU 可黏附在上皮细
胞、红细胞、巨噬细胞、精子等易感宿主细胞膜表面的受体上,
黏附后释放有毒的代谢产物如过氧化物和氨等,同时通过宿
主细胞膜获得脂质和胆固醇,引起细胞膜的损伤,导致宿主细
胞染色体异常,影响蛋白质和DNA合成,严重者导致细胞死
亡。UU具有多种酶活性,与其毒力相关的是脲酶、IgA蛋白
酶、凝脂酶A2、溶酶体; ②宿主免疫力低下,性行为不良或性
伙伴多变。目前认为UU与人体的NGU[ 2 ]、非特异性尿道炎、
生殖道感染[ 3 ]、赖特综合症、不孕不育、流产、早产[ 4, 5 ]、早产
儿呼吸窘迫综合征[ 6 ]胎膜早破、绒毛膜羊膜炎[ 7 ]、胎儿感染
与出生低体重儿[ 8 ]、死胎[ 9 ]新生儿的脑脊髓膜炎等感染、产
后发热、膀胱泌尿系结石、播散性感染等有关,在免疫低下病
人UU可引起脓肿和化脓性关节炎[ 10 ]。而新生儿尤其是极
低体重出生儿的鼻咽、支气管及肺部也可以检测到UU,并认
为其可以引起新生儿的呼吸系统疾病,是新生儿的死亡率增
加,是慢性呼吸系统疾病的一种重要病原体[ 11213 ]。UU在性
成熟无症状的女性宫颈或阴道中的分离率达40% ～80% ,作
为人群即便经过抗生素介入,降低其携带率,经过一段时间的
正常性行为,携带率也会恢复原来水平。而且生殖道的UU
是否具有致病性尚存在争议。
3解脲支原体的基因分型
UU根据分子生物学特征可分为两大生物群及14个血清
型,生物一群包括基因组较小的1、3、6、14型,曾先后命名为
U. Parvum群、Biovar 1群、biovar B群、parvo biovar群,目前被
重新命名为Ureap lama Parvum, 简称Up, 占支原体感染的
90%～92%;生物二群包括剩下的10 个基因组较大的血清
型,也曾先后命名为T960 群、T2960 biovar 群、biovar2 群、
biovarA群,目前被重新命名为Ureap lama urealyticum,简称
Uu,占支原体感染的8% ～10%。生物二群还可分为3个亚
群,亚群1为血清型2、5、8、9;亚群2为血清型4、10、12、13;
亚群3为血清型7、11。2000年在Fanrong等的研究中,为进
一步阐明不同血清型的关系,他们把Uu的10 个血清型的
MBA基因5′端和Up、Uu的所有血清型基因的部分重复区域
进行排序,Uu的10个血清型被分为5个MBA基因型,MBA
基因型A包括血清型2, 5, 8;MBA基因型B包括血清型10;
MBA基因型C包括血清型4、12、13,MBA基因型D包括血清
型9;MBA基因型E包括血清型7、11 。在每一种MBA基因
型成员间没有排列顺序的差异。在Robertson [ 14 ]的研究中血
清型3标准株被作为Up的典型株,Uu的典型株是血清型8。
在极个别情况下,极少数UU菌株的特性不符合任何一个生
物种群,例如血清型3标准株吸附红细胞的能力、还有膜外板
层、磷脂酶A、磷脂酶C、细菌敏感性都没有确立与那一个生
物种群有关。多克隆的抗血清对一或多个抗原决定簇引起的
细胞生长抑制与人类的生物一群有关,但与任何生物二群的
抗原荧光分析决定子无关。
4解脲支原体基因分型方法
4. 1抗原检测法
4. 1. 1 免疫荧光试验
这是最早使用的检测抗原方法,在固体培养的菌落上加
入特异的荧光标记的一抗或二抗,在荧光显微镜下观察结果。
该法简便易行可以对生长在同一培养基表面的混合血清型株
进行鉴定,主要用于UU临床标本的血清分型,其缺点是结果
不易区分荧光染色的菌落和未染色的菌落,受主观因素的影
响较大,且需要特殊的荧光显微镜不易普及使用。
4. 1. 2免疫酶试验
这种检测抗原方法与免疫荧光相似,也可以用于检测同
一培养基上的不同血清型。该法用酶标记抗体代替荧光抗
体,可以在普通显微镜下观察结果。
4. 1. 3免疫结合试验
这种检测抗原方法的关键一步是采用硝酸纤维素膜作为
载体,利用该膜对蛋白质较好的吸附力,并与免疫酶方法相结
合完成对支原体表面抗原的检测。该法易进行大量临床标本
的支原体鉴定及同一固体培养基上混合株型鉴定,可以对固
体培养基上生长不良的菌落进行鉴定,具有较高的特异性,敏
感性与培养法相当,在分型研究中交叉反应的发生率较高。
4. 1. 4免疫印迹技术
这种检测抗原方法的基本原理是蛋白质首先被高分辨力
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS2PAGE)分离,蛋
白质的各分离区带被固定于凝胶的网络结构中,然后经电转
染技术将蛋白质转移至硝酸纤维素膜上,与敏感而特异的固
相免疫测定相结合,利用各种标记试剂灵敏而简便的测出各
种特异性反应。
4. 2抗体的测定
4. 2. 1 代谢抑制试验
原理是UU在液体培养集中反应,可分解尿素产生氨,培
养基的PH值升高,通过颜色指示剂显示。如果将特异的抗
体加入液体培养集中,UU的生长会受到抑制,从而间接抑制
了颜色变化。该法有较高敏感性和特异性,被广泛用于UU
的分型和UU抗体的检测,但交叉反应的发生率较高。
4. 2. 2酶联免疫吸附试验
这种检测抗原方法是以溶解的UU膜蛋白为抗原,抗原
与检测的血清中特异的抗体结合后,再与酶标记的抗人IgG
(或IgM)抗体反应通过酶与底物的反应呈现的颜色来定性定量判断结果。该法具有高特异性高敏感性较好的可重复性,
广泛用于UU的血清学研究。
4. 3 分子生物学方法
4. 3. 1脱氧核糖核酸探针
这种检测抗原方法可直接快速(1～2天)检测泌尿生殖
道标本,特异性高,可以和培养法结合用于UU的检测。
4. 3. 2聚合酶链式反应法
聚合酶链式反应法( PCR)是目前最常用的UU检测和分
型方法,该法具有的优点是:高敏感性、高效率、高特异、高速
度、简便。在UU检测中常用的用于基因扩增的序列有以下
几种: 16SrRNA序列、MBA基因片断、16S223SrRNA基因间隔
序列及尿素酶基因等。利用16SrRNA序列上微小的差异可
以将UU分为两大生物群。MBA基因片断是最常用的扩增
片段, Knox等与1998年依据该基因5! 末端序列的不同设计
合成引物,在此基础上将UU的biovar 1分为1、3、6型,利用
随机片断多态性分析DNA (RAPD)技术进行UU 的biovar 2
的亚群分析,并根据多态性条带将UU的biovar 1进一步分为
13个RAPD亚群。作者同时还运用巢式PCR扩增将biovar 2
分为两个亚群,又运用7个引物进行随机片断多态性分析将
UU分为13 个亚群,其中biovar 2 分为5 个亚群。2000 年
Kong等利用biovar 1中1、3、6、14标准株多条带抗原基因5!
末段之间的序列差异,结合使用群特异性PCR限制性酶切分
析和血清型特异性PCR设计了实验方案,可以鉴别biovar 1
中血清型1、3 /14、6型。Pitcher等[ 15 ]采用PCR2单链构象的
多态性( PCR2SSCP)分析检测技术对UU标准菌株进行研究,
仅需一套简单的引物和单一的扩增步骤,成为大批量UU菌
株分型研究的有效方法。Yi等[ 4 ]将real2time PCR应用于临
床UU基因分型的测定,发现real2time PCR法的灵敏度和特
异度分别是89. 5%和98. 5% ,而培养法的灵敏度和特异度分
别是47. 4%和100% ,从而认为real2time PCR法能快速有效
地用于UU的基因分型研究。PCR方法虽省时,但假阳性或
假阴性均高,与操作者的水平密切相关。
4. 3. 3其他
UU检测和分型还有基因重组技术、反向斑点杂交技术
等方法。
5解脲支原体基因分型与临床流行病学
5. 1解脲支原体基因分型与正常健康人
5. 1. 1解脲支原体基因分型与正常体检人群
在Ren[ 16 ]的研究中,正常体检人群中65%携带UU,其中
95%为biovar 1, 5%为biovar 2。基因型1, 3, 6和14也可在
正常人群中被检出,但单独分离出基因型14是少见的。这一
发现与其它研究结果一致。
5. 1. 2解脲支原体基因分型与正常孕产妇及新生儿
Echahidi等[ 17 ]的研究表明,可以从部分健康新生儿的外
阴、鼻咽部、支气管、眼、血液、胃液中分离到UU,且外阴部的
检出率高于其他部位,女婴的检出率高于男婴,携带时间长于
男婴。Fernandez等[ 8 ]对获取的新生儿标本进行UU 培养和
分型,结果显示分离到的UU菌株biovar 1和biovar 2的比例
为70: 30。
5. 2解脲支原体基因分型与泌尿生殖系感染
UU不同的生物群及血清型与寄居和感染的关系是目前
我国研究的一个热点。2005年在朱庆义的研究中384例泌
尿生殖系感染患者,临床分泌物标本UU阳性占56. 8% ,采用
10对MBA基因分型引物对UU培养阳性标本进行PCR分型
鉴定,结果检出biovar 1占37. 2% , biovar 2 占16. 9% ,其中
biovar 1血清型1、3 /14和6阳性率分别为13. 0%、16. 7%和
7. 5%; biovar 2 亚型1、2、3 阳性率分别为6. 5%、7. 8%、
2. 6%。2006年在覃春容的研究中有阴道炎症状和体征的
601例患者组成的病例组,对照组306例为同期正常体检人
群。病例组中UU 阳性占70. 0% , 其中单纯UU 感染占
57. 2%;单纯UU 感染标本进行基因分型鉴定, biovar 1 占
65. 4% , biovar 2占18. 4% , biovar 1 + biovar 2 两群混合感染
占16. 2%;对照组UU阳性占41. 2% ,其中单纯UU 感染占
32. 7% ,单纯UU感染基因分型biovar 1占79. 3% , biovar 2占
13. 8% , biovar 1 + biovar 2两群混合感染占6. 9%。结论是两
组人群均以b iovar 1感染为主,病例组的特点是两群混合感
染较对照组高,特别是biovar 2与biovar 1中1型的多型别感
染较对照组高,在多型别感染中1型的检出率较对照组高。
对照组的特点是biovar 1较病例组高,且以biovar 1中的血清
1, 3, 6型的单纯感染为主; biovar 1中1型的单型别感染较病
例组高。3、6、14型单型别感染在两组差异无显著性。
5. 3 解脲支原体基因分型与性滥人群
在Ren[ 16 ]的研究中, 261个正常体检妇女和98个性工作
者的宫颈拭子进行了培养, UU培养阳性者用PCR法进行分
群分型,数据表明: ①UU在性工作者中比正常体检妇女更常
见; ②biovar 1中一种基因型的单纯感染( biovar 1基因型1, 3
或6)在正常体检妇女比性工作者中更普遍; ③biovar 2感染
和biovar 1中超过一种基因型的混合感染在性工作者中更普
遍; ④ biovar 1中基因型1、3、6 在性工作者中及正常体检妇
女中没有分布差别;尽管biovar 2的分离率在正常体检妇女
高,但在性工作者中更高(90. 8% ) ,这意味着biovar 2在性工
作者更常见且又是可能成为这个人群的致病菌。性工作者中
biovar 2的分离率(26. 0% )大约是正常体检妇女biovar 2的
分离率(5. 0% )的5倍, biovar 1多于一种基因型引起的混合
感染率(23. 9% )比正常体检妇女(8. 6% )高3倍。
综上所述,尽管人们为探讨不同血清型UU的致病性大
量研究,但都无足以令人信服的证据说明某种血清型肯定和
某种疾病有关,目前多数研究认为,人类泌尿生殖道寄居或感
染的UU绝大部分为biovar 1,其中某些类型与疾病有关,所
以UU的分型对疾病的发病机制研究有重要的作用,是否特
定型别UU与致病或寄居具有相关性仍是现在亟待解决的问
题。目前的研究在结合治疗、耐药、预后方面仍有待进一步的
研究。
