[HPLC法测定气血双补口服液中芍药苷的含量] 气血双补口服液
时间：2019-04-14 03:21:35 来源：柠檬阅读网 本文已影响 人 
[摘要] 目的 建立气血双补口服液中芍药苷含量的测定方法，为提高该制剂的质量标准提供研究依据。 方法 采用高效液相色谱法，流动相：甲醇-0.1%磷酸（29∶71）；色谱柱：汉邦ODS-C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；体积流量：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：230 nm；进样量：10 μL。 结果 芍药苷在10.00～80.00 μg/mL范围内线性关系良好，平均回收率为99.45 %，相对标准偏差（RSD）为0.63%。 结论 该方法简便、可靠、重现性好，可用于气血双补口服液的质量控制。
[关键词] 气血双补口服液；芍药苷；高效液相色谱法
[中图分类号] R282.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）05（b）-0127-02
气血双补口服液为南京军区南京总医院制剂科生产的中药复方制剂，处方是由白芍、黄芪、当归、仙茅、熟地黄等10味中药精制而成，具有益气养血、温肾填精的功效，主要用于治疗气血两虚证，症见头晕目眩、少气懒言、倦怠、乏力、面色萎黄、心悸失眠、手足发麻等。该产品临床使用十余年，疗效确切。气血双补口服液现行质量标准为采用薄层色谱法对黄芪、熟地黄和枸杞子进行定性鉴别，而对于方中臣药白芍却没有制订相应的检测项目。鉴于目前高效液相色谱法在含有白芍的中成药检测中的广泛应用[1-6]，本实验建立的适用于气血双补口服液中芍药苷的高效液相色谱测定方法，为有效控制该产品质量，制订该制剂新的质量标准提供参考依据。
1 仪器与试药
UV 1700紫外-可见分光光度计；Waters高效液相色谱仪（Waters 1525泵，2487紫外检测器）；KQ 2200DB型数控超声波清洗器；梅特勒尔AE 240电子天平。甲醇：色谱纯（美国天地）；水：自制纯化水；其他试剂均为分析纯。
白芍、枸杞子、熟地黄、当归、仙茅、淫羊藿、黄芪、茯苓等药材均来自南京医药有限公司，经任海祥副主任药师鉴定为正品；气血双补口服液（10 mL/支）为南京军区南京总医院制剂科生产，批号为101021、101123、110218、110314、110407。
芍药苷对照品（批号：110736 - 200934）购自中国药品生物制品检定所。
2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 色谱条件
汉邦ODS-C18色谱柱（5 μm，250 mm × 4.6 mm）；流动相：0.1%磷酸水溶液-甲醇（71∶29）；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：230 nm；进样量：10 μL。在上述条件下，芍药苷与其他组分能达到基线分离。
2.1.2 溶液的制备
2.1.2.1 对照品溶液的制备 将芍药苷对照品减压干燥后精密称取4.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加入甲醇约30 mL，超声溶解15 min，冷却至室温，甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。取对照品储备液稀释，可得80.00、60.00、40.00、20.00、10.00 μg/mL等一系列浓度的对照品溶液。
2.1.2.2 供试品溶液的制备 精密量取气血双补口服液样品10 mL，首先用乙醚萃取3次，每次10 mL。合并萃取后的水层，加入正丁醇再萃取3次，每次20 mL。合并正丁醇液于蒸发皿内，置水浴锅上挥干。残留物用稀乙醇溶解，置于50 mL容量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀后用0.45 μm的微孔滤膜过滤，续滤液即为供试品溶液。
2.1.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺少白芍的气血双补口服液处方药材，按照配制工艺配制气血双补口服液，然后按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.1.3 方法的专属性考察
按照上述色谱条件对对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液进行分析，结果无干扰。见图1。
2.1.4 线性关系考察
将上述制备的对照品溶液各进样2次，测平均峰面积积分值。以峰面积积分值（μV·s）为纵坐标，对照品浓度（μg/mL）为横坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程为：Y = 14 821X-51 902，r = 0.999 4。结果表明，芍药苷对照品浓度在10.00～80.00 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.1.5 精密度试验
精密吸取10 μL浓度为60.00 μg/mL的对照品溶液，重复进样6次，芍药苷峰面积平均值为857 282，RSD为0.55%，表明本方法精密度良好。
2.1.6 稳定性试验
取同批气血双补口服液（10 mL/支，批号：110407），按照供试品溶液的制备方法处理后，分别于0、1、2、4、6、8 h，进样10 μL测定，计算样品中芍药苷含量为0.351 mg/支，RSD = 1.26 %。表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.1.7 加样回收率试验
精密量取6份已知含量的样品，每份10 mL，置入烧杯中，分别精密加入100 μg/mL芍药苷对照品溶液4、6、8 mL各2份，稍加热挥去甲醇，放冷，用乙醚萃取3次，每次10 mL。合并萃取后的水层，加正丁醇萃取3次，每次20 mL。合并正丁醇液于蒸发皿内，置水浴锅上挥干。残渣用稀乙醇溶解，置于50 mL容量瓶中，用稀乙醇定容至刻度，充分摇匀后以0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，按上述色谱条件测定芍药苷峰面积积分值。芍药苷平均回收率为99.45%，RSD=0.63%。见表1。
2.2 结果
取5批样品（批号：101021、101123、110218、110314、110407），按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定样品，以外标法计算样品中芍药苷的含量。5批样品芍药苷的平均含量为0.352 mg/支。见表2。 3 讨论
3.1 实验意义
气血双补口服液现行质量标准中只对黄芪、熟地黄和枸杞子进行定性鉴别，无定量检测项目。本实验利用高效液相色谱法对气血双补口服液中的芍药苷进行含量测定，具有高效、快速、高灵敏度、操作简便、重复性好等特点，为提高该制剂的质量标准提供参考。
3.2 供试品制备方法的选择
芍药苷是一种单萜类糖苷化合物，易溶于乙醇、甲醇、氯仿。由于气血双补口服液为液体制剂，且处方组成较为复杂，干扰成分较多，因此本实验先用乙醚萃取去除极性较小的亲脂性化合物，再用正丁醇萃取芍药苷，以降低干扰性化合物对芍药苷测定的影响。
3.3 测定波长的选择
《中国药典》2010年版[1]及相关文献[2-3]中，芍药苷的测定波长均为230 nm，故本实验采用230 nm作为测定波长。
3.4 流动相的选择
《中国药典》2010年版[1]及相关文献[4-6]中用乙腈-0.1%磷酸水溶液（14∶86）作为流动相。实验发现在该条件下芍药苷峰拖尾现象明显，且加入三乙胺后无明显改善。改用甲醇-0.1%磷酸水溶液（14∶86）后，芍药苷峰拖尾现象有所改善，但峰宽较大，保留时间较长。通过调整甲醇-0.1%磷酸水溶液的配比（15∶85、20∶80、25∶75、30∶70、29∶71）进行测定后，发现在甲醇-0.1%磷酸水溶液为29∶71时芍药苷峰型较好，保留时间相对较短，故本实验最终采用比例为29∶71的甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相进行芍药苷的含量测定。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：96-97.
[2] 刘霞，郝旭亮，倪艳，等.高效液相色谱法测定补气和血胶囊中芍药苷的含量[J].时珍国医国药，2004，15（9）：568-569.
[3] 闫振国，杨垒.HPLC测定十味扶正胶囊中芍药苷含量[J].中国现代中药，2007，9（5）：24-26.
[4] 胡丹，吕长淮，吴玮.高效液相色谱法测定归芍调经胶囊中芍药苷的含量[J].安徽医药，2011，15（1）：42-43.
[5] 韩秀兰.HPLC法测定暖宫孕子丸中芍药苷的含量[J].中国药品标准，2009，9（6）：467-469.
[6] 郭奕芬，杨巧琦.HPLC测定健儿乐冲剂中芍药苷的含量[J].现代食品与药品杂志，2007，17（3）：49-51.
（收稿日期：2011-12-22 本文编辑：卫轲）
