真菌革兰染色_革兰染色法在阴道分泌物真菌检验中的临床应用分析
时间：2019-04-14 03:18:43 来源：柠檬阅读网 本文已影响 人 
[摘要] 目的 研究革兰染色法在阴道分泌物真菌检验中的临床应用。 方法 2009年1月～2011年8月收集我院妇科门诊及体检患者阴道分泌物764例，均分为两份分别采用生理盐水法与革兰染色法进行真菌检验并比较分析。 结果 对764例患者阴道分泌物分别进行真菌检验，革兰染色法阳性率41.5%（317/764），直接镜检法28.9%（221/764），两者比较差异有统计学意义（χ2=133.707，P = 0.000）。对两种方法的关联性进行McNember检验，结果为χ2=94.010，P =0.000，提示两种方法检出阳性率具有相关性。 结论 革兰染色法在阴道分泌物真菌检验中具有更好的敏感性，检出率高，值得临床检验进一步推广应用。
[关键词] 阴道分泌物；革兰染色；真菌感染
[中图分类号] R446.5[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2012）10-0099-02
The clinical application of Gram’s staining in fungal infection test of vaginal discharge
JIN Xiaohua
Clinical Laboratory of Dermatology Hospital of Yiwu in Zhejiang Province, Yiwu 322000, China
[Abstract] Objective To investigate efficacy of Gram’s staining in fungal infection test of vaginal discharge. MethodsFrom January 2009 to August 2011，the vaginal discharge of 764 cases were collected and tested for fungal infection by both Gram’s staining and direct wet slices. The positive rate of fungal infection and correlation of the two tests were analyzed by SPSS 17.0 for Windows. Results Compared to the direct wet slices, the positive rates of fungal infection by Gram’s staining resulted in significant difference (41.5% vs 28.9%, χ2=133.707，P = 0.000). McNember test for correlation between the two tests showed significant correlation (χ2=94.010，P = 0.000). Conclusion The Gram’s staining in fungal infection test of vaginal discharge has better sensivity，which deserves wide application.
[Key words] Vaginal discharge; Gram’s staining; Fungal infection
各种病原体引起的阴道炎和宫颈炎症，表现为阴道分泌物异常、瘙痒、灼痛以及性生活障碍，会严重地危害着妇女的身心健康[1]。阴道分泌物涂片检查是妇科检查的一项初筛试验，一般采用直接涂片法，因其方便快速，在临床广为应用[2]。但是直接涂片法有时很难发现分泌物的真菌感染，容易造成漏诊，延误患者的及时诊疗。虽然革兰染色法步骤较为繁琐、耗时较长，但是可对妇科阴道炎症进行比较全面的筛查，为临床诊疗提供病原学参考依据[3，4]，近年来越来越受到临床工作者的青睐。本研究旨在对革兰染色法与直接涂片法在阴道分泌物真菌检验中的临床应用进行比较分析，以研究染色法在阴道分泌物真菌检验中的功效。
1 材料与方法
1.1 研究对象
经我院伦理委员会批准通过，获得患者知情同意后，收集2009年1月～2011年8月于我院妇科就诊者和体检者阴道分泌物764份，均分为两份，分别采用革兰染色法与直接涂片法。
1.2 仪器与试剂
革兰染色液（上海沪宇生物有限公司生产），光学显微镜（北京华测科学中心生产）。
1.3 方法
直接镜检法以无菌棉拭子用生理盐水湿润后，蘸取阴道分泌物小心均匀涂于载玻片上进行直接镜检。
革兰染色法则取阴道分泌物均匀涂于载玻片，过火固定后，按照初染、媒染、脱色、复染的步骤进行染色完毕后，显微镜下油镜检查。具体方法如下：初染：在载玻片上滴草酸铵结晶紫数滴（以完全覆盖标本为准，下同），静置染色1 min后水冲洗；媒染：滴加碘液覆盖涂面，染色1 min水洗，吸水纸吸去多余水分；脱色：滴加95%酒精数滴，并轻轻摇动载玻片进行脱色30 s后，水洗并吸干水分；复染：滴加蕃红染色液（稀）10 s后，水冲洗，干燥后即可进行镜检。两种方法均以镜下发现真菌菌体或孢子为阳性。所有标本均由两名熟练的技师操作镜检。
1.4 统计学处理
所有统计均在SPSS 17.0软件中进行。计数资料比较采用χ2检验，两种方法的关联性进行McNember检验，检验水准α=0.05。
2 结果
本组764例患者阴道分泌物检验，革兰染色法真菌阳性率41.5%（317/764），直接镜检法28.9%（221/764），二者比较差异有统计学意义（χ2=133.707，P = 0.000）。两种方法的关联性进行McNember检验，χ2=94.010，P = 0.000，提示两种方法检出阳性率具有相关性，可相互替代。
3 讨论
女性阴道属于一个复杂的微生态系统，其内寄生着多种微生物，不同微生物之间维持着相对动态平衡。随着年龄、妊娠等的改变，妇女阴道菌群内部会发生着不同菌群比例改变。阴道有自净作用，阴道正常pH值在4.0～4.5之间。健康妇女阴道正常菌群中的优势菌主要是乳酸杆菌，占阴道微生物90%以上。由于抗生素长期使用、自身免疫力不足等因素的影响，乳酸杆菌大量死亡，将会引起菌群失调，真菌繁殖加快，导致真菌性阴道炎[5]。妇女阴道真菌感染性疾病发病率高，培养等方法检测所需时间长，不利于对患者及时诊治。直接涂片检查时，由于阴道分泌物涂片的真菌含量非常少，而且会受镜检背景中混杂的白细胞、上皮细胞等有形成分的影响，检出率较低。阴道分泌物直接涂片镜检找真菌孢子及菌丝简单快速，适合于门诊开展，但是此方法容易受主观因素影响，假阳性和假阴性率都比较高，难以适应现在比较苛刻的医疗环境。真菌数量少或孢子形态变化大是导致假阴性的主要主观因素，检验者难以正确辨别光滑念珠菌、热带念珠菌等变异性较多的真菌。而且随抗菌药物的广泛使用，细菌多重耐药及继发的双重感染给临床治疗带来很大的困难，诊断不明确时凭经验用药、盲目加大剂量用药，易导致已存在菌群失调加重、真菌感染进行性发展。
阴道真菌感染是妇科常见病、多发病，主要表现为阴道分泌物性状改变。阴道分泌物涂片检查是妇科疾病的常规检查项目，可以直接反映阴道及宫颈感染病原体及炎症程度[6]。传统的直接涂片法方便、快捷，适宜于大规模筛检，但是其敏感性较差，检出率低，可能造成漏诊、误诊，延误患者病情，甚至出现不必要的医疗纠纷[7]。因此有很多学者建议将染色法检验列为阴道分泌物的诊查常规，提高检出率。革兰染色法虽然步骤较为繁琐，但是同时可以对多项目检查，特别是淋球菌、加德纳菌及其他条件致病菌检测敏感性高[8]。推广应用染色法，可为临床提高更准确结果，降低了医生滥用抗生素的可能，为医生合理有效地诊疗提供必需的实验室依据，可及时解决妇女的疾患，改善家庭关系，具有良好的社会、经济效益[9]。同时因妇科疾病影响致使夫妻间性生活受到影响的情况得到有效改善。对直接镜检法阴性的妇科阴道分泌物可疑标本应再次进行革兰染色法检测，以免漏诊。
本研究对764例患者阴道分泌物分别进行真菌检验，染色法阳性率41.5%（317/764），直接镜检法28.9%（221/764），二者相比较差异有统计学意义（χ2=133.707，P = 0.000）。两种方法的关联性进行McNember检验，χ2=94.010，P = 0.000，提示两种方法检出阳性率差异有统计学意义。我们的研究结果表明阴道分泌物真菌检验中，染色法阳性检出率优于直接涂片法；而且相关性检验显示两种方法相关性良好，可以相互取代[10，11]。因此，我们可以认为染色法行阴道分泌物真菌检验可以取代直接涂片法，而且其检验的敏感性更佳。
综上所述，染色法在阴道分泌物真菌检验中有其自身的优势，值得临床检验进一步推广应用。
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（收稿日期：2011-12-14）
