产后抑郁症与淋巴细胞亚群及细胞因子水平的相关性
时间：2022-12-07 09:10:05 来源：柠檬阅读网 本文已影响 人 
谢 婷 夏尊恩 付晴晴 曾雪慧 易念华
1华中科技大学同济医学院附属湖北妇幼保健院妇保科 湖北 武汉 430070；
2武汉大学人民医院检验科 湖北 武汉 430060
产后抑郁症（postpartum depression，PPD）是临床较为常见的心理障碍类疾病，发病率高且呈逐年递增趋势。产后抑郁症严重威胁产妇的身心健康，使产妇产生焦虑、情绪低落、易怒、食欲低下等表现，严重的还可能伤害自己和新生儿，给产妇家庭和社会造成巨大危害［1］。目前有调查结果显示，中国 女 性PPD 发 病 率 在15%～30% 左 右［2］。由 于PPD 的发病机制复杂，多数研究认为其与产妇体内激素水平变化、免疫系统紊乱、下丘脑-垂体-肾上腺轴功能失调、心理与社会因素、遗传、神经系统改变等有关［3-6］。近年来随着对抑郁症免疫学病因的逐步深入研究，PPD 发病与淋巴细胞免疫调节的关系已成为国内外的研究热点，大多数是针对炎症因子与PPD 的相关性研究，且国内多采用传统的ELISA方法进行检测［7］，而本研究运用流式细胞技术同时检测PPD 产妇和正常产妇细胞因子的含量变化以及淋巴细胞亚群的分布比例和绝对计数值，从而探讨PPD 患者的免疫失衡机制，为临床诊断和防治提供参考依据。
1.1 研究对象选取华中科技大学同济医学院附属湖北妇幼保健院2019 年5 月至2020 年10 月收治的经临床确诊的PPD 患者86 例，年龄22～40 岁，均符合美国精神病学会《精神障碍诊断与统计手册》第5 版中关于产后抑郁症的诊断标准，产后采用爱丁堡产后抑郁量表（Edinburgh postnatal depression scale，EPDS）评分≥13 分者［8］。排除标准：妊娠期间无高血压、糖尿病、子痫前期等妊娠并发症，分娩时无产后出血、羊水栓塞、子宫破裂等产时产后并发症。既往有精神障碍疾病史，严重中枢神经系统疾病史，自行服用过抗抑郁或抗焦虑药物，有传染病者，有其他家族遗传病者，有肝、肾、造血、免疫系统等严重原发性疾病者予以排除。随机选取同期62 例非产后抑郁症的产妇作为正常对照组，年龄21～40 岁，排除精神障碍及其他重要器官疾病者，产后EPDS 评分＜13 分者。两组受检者均对本研究知情同意并签署知情同意书，并经医院伦理委员会批准。分别抽取PPD 和对照组妇女EDTA 抗凝静脉全血2 mL，常温下保存，48 h 以内上机检测淋巴细胞亚群。同时离心分离血浆，-20 ℃冷冻保存统一检测细胞因子水平。
1.2 抑郁症评价方法所有受检者采用EPDS 自评量表进行评分，该量表共包含10 个条目，每个条目分为4 级：从不（0 分），偶尔（1 分），经常（2 分），总是（3 分），在产后6 周内进行。EPDS 自评量表是目前产后抑郁症研究中最常用的筛查工具，EPDS 总分≥13 分说明存在抑郁症状，总分越高，表明抑郁程度越严重。同时采用焦虑自评量表（self-rating anxiety scale，SAS）和抑郁自评量表（self-rating depression scale，SDS）对所有受检者进行焦虑和抑郁评价［9］。
1.3 仪器与试剂使用美国BD 公司FACSCalibur 流式细胞仪检测淋巴细胞各亚群的比例、绝对计数值和Th1/Th2 细胞因子水平。淋巴细胞亚群试剂采用BD 公司IMK 试剂盒和BD 公司绝对计数管。细胞因子试剂采用人Th1/Th2 亚群检测试剂盒（流式荧光法），购自杭州赛基生物科技有限公司。
1.4 淋巴细胞亚群检测分别在2 支流式绝对计数管中加入CD3-FITC/CD8-PE/CD4-APC/CD45-PerCP 和CD3-FITC/CD16+56-PE/CD19-APC/CD45-PerCP 试剂各10 μL，同时分别加入50 μL 抗凝全血混匀，室温下避光孵育15 min，然后加入450 μL 红细胞裂解液震荡混匀，避光反应10 min 后上机检测。以CD45/SSC 设门圈定淋巴细胞，CD3+区域细胞为T 淋巴细胞，CD3+且CD4+区域细胞为CD4+Th 细胞，CD3+且CD8+区域细胞为CD8+Ts细胞，CD3-CD19+区域细胞为B 淋巴细胞，CD3-CD16+CD56+区 域 细 胞 为 NK 细 胞 ，CD3+CD16+CD56+区域细胞为NKT 细胞。
1.5 细胞因子检测采用流式多重蛋白定量检测技术测定Th1/Th2 共6 种细胞因子水平，包括IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ 和TNF-α。在样本管中加入25 μL 待检测样本，向标准品管中加入25 μL对应浓度的标准品，分别加入25 μL 捕获微球和25 μL 荧光抗体，所有上样管振荡混匀，室温避光孵育2.5 h。然后每管加入1 mL PBS 溶液洗涤，1 500 r/min 离心3 min，弃上清，每管加入100 μL PBS 溶液，振荡重悬后上机检测，软件自动分析数据，制作标准曲线后计算得出6 种细胞因子的表达水平。
1.6 统计学方法使用SPSS 23.0 版进行统计分析。计量数据以平均数±标准差表示。二组间比较采用t检验，两变量间相关性采用Pearson 线性相关分析。以P＜0.05 为差异有统计学意义。
2.1 两组受检者抑郁量表评分比较产后抑郁症组患者的EPDS 评分、SAS 评分及SDS 评分均显著高于正常对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。
表1 产后抑郁症组与正常对照组抑郁量表评分比较(-x±s)
2.2 两组T 淋巴细胞亚群比例及绝对值计数检测结果比较产后抑郁症组产妇CD4+Th 细胞的比例、绝对值计数、CD4+/CD8+比值均显著高于正常对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.01），而CD3+细胞和CD8+细胞百分比和绝对值计数结果无统计学差异（P＞0.05），见表2。
表2 两组T 淋巴细胞亚群比例及绝对值计数检测结果(±s)
表2 两组T 淋巴细胞亚群比例及绝对值计数检测结果(±s)
组别正常对照组产后抑郁组例数62 86 tP--CD3+（%）69.76±4.37 71.12±4.84 1.76 0.08 CD3+（个/μL）1 072±86 1 098±91 1.75 0.08 CD4+（%）34.65±4.57 40.82±5.35 7.35＜0.01 CD4+（个/μL）716±25 768±31 10.90＜0.01 CD8+（%）26.73±3.19 25.94±3.08 1.52 0.13 CD8+（个/μL）391±53 380±58 1.18 0.24 CD4+/CD8+1.41±0.29 1.63±0.32 4.29＜0.01
2.3 两组B 淋巴细胞、NK 细胞、NKT 细胞比例及绝对值计数比较产后抑郁症组产妇的B 淋巴细胞和NK 细胞比例和绝对值计数略低于正常对照组，但两组比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。产后抑郁症组产妇的NKT 细胞显著高于正常对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.01），见表3。
表3 两组B 淋巴细胞、NK 细胞、NKT 细胞比例及绝对值计数检测结果(-x±s)
2.4 两组外周血Th1/Th2 细胞因子水平比较产后抑郁症组产妇的IL-6、IFN-γ 水平明显高于正常对照组，两组比较差异有统计学意义（均P＜0.01），而IL-2、IL-4、IL-10 和TNF-α 水平在两组间比较差异无统计学意义（均P＞0.05），见表4。
表4 两组外周血Th1/Th2 细胞因子水平比较(pg/mL,±s)
组别正常对照组产后抑郁组例数62 86 tP--IL-2 2.95±0.76 3.17±0.84 1.64 0.10 IL-4 2.83±0.51 2.79±0.53 0.46 0.65 IL-6 7.69±1.64 13.44±3.26 12.76＜0.01 IL-10 3.56±0.83 3.38±0.78 1.35 0.18 TNF-α 3.88±0.92 4.19±1.17 1.73 0.08 IFN-γ 3.81±0.67 6.52±1.28 15.23＜0.01
2.5 EPDS 评分结果与淋巴细胞亚群、细胞因子水平的相关性分析产后抑郁组中EPDS 评分结果与淋巴细胞亚群、细胞因子水平的相关性分析结果显示，EPDS 与CD4+T 细胞比例、CD4+/CD8+、NKT细胞比例、IL-6 和IFN-γ 水平呈正相关关系（r=0.565、0.527、0.615、0.602、0.628，均P＜0.05），差异有统计学意义。
产后抑郁症（PPD）是一种常见且严重的精神疾病，该病通常起病隐匿，不易被发现，严重可导致产妇的自杀，应引起临床精神科和妇产科医生的高度重视。根据产前和产后不同时间段对孕产妇心理健康和主要危险因素进行必要排查，早期发现、早预防，选择有效的方式进行恰当干预是不可或缺的［10］。EPDS、SAS 和SDS 等自评量表是目前国内外应用较多的PPD 筛查量表，得分越高表明患者的焦虑和抑郁越严重。由于PPD 发病机制较复杂且尚未明确，近年来机体免疫炎症反应与抑郁的相关性越来越受到关注，现已证实免疫系统失调在PPD中起着重要作用，应用抗炎药物治疗可以帮助一些抑郁症患者［11］。
产后孕妇体内的免疫功能状态发生较大变化，在异常病理状态下，孕妇的免疫细胞比例和数量分布改变，促进某些异常功能的发生，如炎症因子表达水平增加，干扰体内神经递质系统，从而促进抑郁的发生［12］。外周血的淋巴细胞主要分为三群，分别为T 细胞、B 细胞和NK 细胞。CD3 主要表达于成熟T 淋巴细胞表面，可作为T 细胞的标志物，并可进一步分为CD3+CD4+T 细胞和CD3+CD8+T 细胞两个亚群，CD4+T 细胞比例升高可使产妇细胞免疫功能增强，CD8+T 细胞直接攻击受损细胞，抑制迟发性超敏反应及增殖反应等。CD19+淋巴细胞称为成熟B 淋巴细胞，主要介导体液免疫功能。NKT（CD3+CD16+CD56+）细胞是一种新鉴定的免疫调节性T 细胞，其细胞表面同时有T 细胞和NK细胞受体，主要介导免疫调节和细胞毒作用。NKT细胞被激活后分泌大量的细胞因子，包括IL-13、IFN-γ 等，发挥炎症诱导作用。情绪障碍患者T 细胞的改变与神经递质水平密切相关，由于色氨酸水平降低是情绪障碍的标志，同时色氨酸又是T 细胞必不可少的生长因子，因此色氨酸代谢的改变会影响T 细胞的功能和分化增殖。本研究显示PPD 组CD4+Th 细胞、NKT 细胞的比例和计数以及CD4+/CD8+比值均较正常对照组明显升高（P＜0.01），提示患者体内的免疫调节有一定程度的失衡。Osborne 等［13］研究发现孕产妇在分娩后体内的淋巴细胞亚群比例发生明显的改变，CD4+T 细胞和调节性T 细胞明显增加；
而与正常产妇比较，PPD 患者的调节性T 细胞明显减少。
既往研究显示，免疫系统的变化尤其是炎症细胞因子在PPD 中具有重要的作用，PPD 可能是一种精神-神经-免疫学障碍，患者免疫系统失衡，促炎细胞因子水平明显升高，炎症与抑郁之间的关系可能是双向的。细胞因子参与PPD 发生的主要机制是影响下丘脑-垂体-肾上腺轴，导致其长期紊乱和过度激活，促进促肾上腺皮质激素和生长激素等释放，皮质醇水平升高。外周免疫激活可通过释放前炎症细胞因子导致神经内分泌变化及与抑郁症相关的行为改变［14］。另一方面细胞因子与性激素、神经递质等相互作用，类固醇和催乳素会影响T 细胞的生长和分化，并促进T 细胞分泌细胞因子，进而会反馈调节5-羟色胺系统的代谢，并产生神经毒性代谢产物，这是炎症因子导致抑郁的重要分子通路。
CD4+T 细胞可根据其分泌细胞因子的不同分为Th1 和Th2 两种亚群，其中Th1 细胞主要分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α 等，介导细胞免疫反应，促进巨噬细胞活化，产生细胞毒作用。Th2 细胞主要分泌IL-4、IL-6 和IL-10，介导体液免疫反应。IL-6 是重要的促炎症因子，能刺激垂体前叶促肾上腺皮质激素释放，导致糖皮质激素水平升高，色氨酸转变为5-羟色胺合成受阻。Simpson 等［15］观察到妊娠晚期IL-6 和IL-10 水平与产后抑郁症状之间存在显著相关 性，抑 郁 症 状、IL-6 和IL-10 水 平 是 产 后EPDS 评分的显著预测因子。IFN-γ 是一种多功能细胞因子，具有广谱抗病毒、影响细胞生长和分化、调节免疫功能等多种生物活性。临床研究发现，在使用重组干扰素治疗的过程中，有些患者会出现极度疲劳感、易怒、失眠、食欲不振等症状，甚至产生自杀倾向，这些不良反应与抑郁症的表现类似［16］。本研究结果显示，PPD 组产妇的IL-6 和IFN-γ 水平均显著高于正常对照组，两组比较差异有统计学意义（均P＜0.01）。Pearson 相关分析结果显示，PPD 组患者的EPDS 评分与血清IL-6 和IFN-γ 水平呈正相关，提示患者血清IL-6 和IFN-γ 水平越高，EPDS 评分越高，抑郁症病情越严重。
总之，PPD 患者的淋巴细胞亚群发生了一定程度的紊乱，CD4+Th 细胞和NKT 细胞的比例和绝对计数值较产后非抑郁症者明显升高，同时血清IL-6和IFN-γ 水平显著增高。因此，产后抑郁症的发生与免疫系统的异常改变密切相关，早期对产妇淋巴细胞亚群和细胞因子水平的检测具有重要的临床意义。
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