简述组织培养快速繁殖的一般程序【蛇含委陵菜组织培养快速繁殖研究】

时间：2019-03-30 03:16:36　来源：柠檬阅读网本文已影响人

　　摘要：以蛇含委陵菜带节茎段、茎尖、根颈为外植体进行组织培养快速繁殖研究。结果表明：茎尖作为外植体诱导表现最好，诱导率可达100﹪，茎段则以第三节表现最好，第二、四节次之，而根颈在增殖培养中表现最好；在诱导培养过程中，以MS+6-BA 2.0 mg／L培养基最优；在增殖过程中，增殖一代最佳的培养基为MS+BA 2.0mg/L+IAA 0.2mg/L，增殖率达5.0倍；在生根培养过程中，最优的培养基为1/2 MS+NAA0.4 mg/L，平均每株主根数可达7.6个。
　　关键词：蛇含委陵菜；组织培养；激素；培养基
　　1 前言
　　蛇含委陵菜（Potentilla kleiniana）为蔷薇科委陵菜属多年生草本。蛇含委陵菜适应性强，养护管理简单，观赏价值高，作为药用植物运用到园林中作地被，不仅有良好的观赏价值，还具保健作用，可以增加人们的健康知识[1]。由此可见，蛇含委陵菜有广泛的开发利用前景，为加快蛇含委陵菜的繁殖与推广应用，完善蛇含委陵菜种苗标准化繁殖技术体系，笔者以蛇含委陵菜带节茎段、茎尖、根颈为外植体进行组织培养快速繁殖研究。
　　2材料与方法
　　2.1材料
　　供试材料为湖南农业大学特色观赏植物创新基地生长健壮的蛇含委陵菜。
　　2.2 试验方法
　　将取回的材料洗净，分别采用A1（水培）、A2（1：100消毒液培）、A3（1：200消毒液培）和A4（盆栽），一个星期后，取蛇含委陵菜带节茎段、茎尖、根颈为外植体，用自来水冲洗干净，在超净工作台上，先用70﹪酒精浸泡20s，再用0.1﹪升汞加1～2滴酒精和1～2滴土温浸泡3min（不断晃动，使其充分接触），然后用无菌蒸馏水冲洗5～6次，再用无菌滤纸将水分吸干，在无菌条件下将外植体切成0.8～1.0cm备用[2]。
　　在培养温度（22�?）℃，光照强度2000Lx，光周期12h/d，培养基pH值5.8～6.0条件下，进行诱导培养，增殖培养和生根培养[3]。
　　2.2.1 诱导培养
　　以茎尖、茎段为外植体分别接种到5种不同激素组合培养基上，比较不同激素组合对不同外植体诱导成芽的影响。5 种培养基组合为：B1：MS ；B2：MS+6-BA 2.0 mg／L；B3：MS+6-BA 1.0 mg／L+NAA 0.5 mg／L；B4：MS+6-BA 2.0 mg／L+NAA 0.5 mg／L；B5：MS+6-BA 3.0 mg／L+NAA 0.5 mg／L。20天后，统计外植体诱导芽的数量并计算诱导率；以蛇含委陵菜茎尖、根颈为外植体接种到最优诱导培养基：MS +6-BA2.0mg/L上，一周后统计外植体诱导芽的数量并计算诱导率，比较不同预处理对诱导的影响；以蛇含委陵菜匍匐茎不同节位为外植体接种到最优诱导培养基：MS +6-BA2.0mg/L上，一周后统计外植体诱导芽的数量并计算诱导率，比较不同节间对外植体诱导的影响。
　　2.2.2 增殖培养
　　切取外植体诱导生成的芽接种到增殖培养基上进行第一代增殖培养，比较四种不同激素组合对茎尖芽增殖的影响。四种激素组合为：C1：MS+6-BA 2.0 mg／L+IAA 0.1 mg／L；C2：MS+6-BA 2.0 mg／L+IAA 0.2 mg／L；C3：MS+6-BA 1.0 mg／L+IAA 0.1 mg／L；C4：MS+6-BA 1.0 mg／L+IAA 0.2 mg／L。20天后统计第一代芽数量。
　　2.2.3 生根培养
　　切取增殖培养的材料分别接种到生根培养基上，比较五种不同的培养基对生根的影响。五种培养基激素组合为：D1：1/2 MS；D2：1/2 MS +NAA0.2 mg/L；D3：1/2 MS +NAA0.4 mg/L；D4：1/2 MS +NAA0.6 mg/L；D5：1/2 MS +NAA0.8 mg/L。20天后统计生根数量。
　　3结果与分析
　　3.1 激素浓度、预处理、外植体材料对外植体诱导芽的影响
　　不同的外源激素浓度不同，茎尖芽诱导的效果也不同。以茎尖为外植体，B2（MS+6-BA 2.0 mg／L）诱导平均芽数为1.8个, B3（MS）平均芽数为1.6个,效果比B1 、B4 、B5好,并且以B2（MS+6-BA 2.0 mg／L)对茎尖芽的诱导效果最好，平均诱导芽数达为1.8个；对选取的蛇含委陵菜进行不同处理之后，茎尖在诱导培养基上表现一致,100﹪无感染。根颈则表现为用1：200消毒液培处理之后感染率明显降低；不同节间茎段的感染率存在很大差异，第一节间和第五节间极易感染，若必须选取应加大消毒力度。第二到四节间表现良好，感染率低，生长也更为迅速。
　　不同外植体对芽的诱导率有很大影响。综合来看：茎尖的诱导效果最好，均可达到100﹪；各节中，则以第三节表现最好，诱导率80﹪，第四节次之，为75﹪，第二节为60﹪，第五节与第一节分别仅为40﹪和25﹪。根颈在用1：200消毒液培处理之后，诱导率可从0﹪提高到80﹪。
　　3.2 激素浓度对茎尖芽增殖的影响
　　不同激素浓度对茎尖芽增殖有明显影响。C2与C1、C3 、C4之间存在显著性差异，C3 、C4 两个处理间差异不明显，其中以C 2 ：MS+6-BA2.0 mg／L +IAA 0.2 mg／L培养基增殖情况的效果更好，增殖率可达5.0倍。
　　3.3 激素浓度对生根的影响
　　不同激素浓度对茎尖芽生根有明显影响。D3与D2、D4、D5之间存在极显著差异，D3：1/2 MS+NAA0.4 mg/L诱导生根效果最好，平均每株主根数可达7.6个，确定为最佳生根培养基组合。另外，从D1能够得知，1/2 MS培养基也可以诱导生根，但效果不明显，需要的生长时期相对较长。
　　4结论
　　4.1 外植体的选择和预处理
　　茎尖作为外植体表现最好，不需要预处理，诱导率为100％；匍匐茎则以基部以上第三节表现最好，第四、第二节次之；根颈是优良的外植体材料，因为在增殖过程中会生长出丛芽，增殖率可提高到7.8倍以上，但是要对其进行预处理，最好接种前采用1：200消毒液培养一个星期，可将其诱导率从0%提高到80％。
　　4.2 最优培养基在诱导培养过程中，MS+6-BA 2.0 mg／L培养基最优；在增殖过程中，增殖一代最佳的培养基为MS +BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，增殖率达5.0倍；在生根培养过程中，最优的培养基为1/2 MS+NAA0.4 mg/L，平均每株根数可达7.6个。
　　(本文指导老师：吴铁明)
　　参考文献:
　　[1]刘敏.花卉组织培养与工厂化生产.北京:地质出版社,2006,(6)
　　[2]刘青林,马祎,邓玉梅.花卉组织培养.中国农业出版社,2003
　　[3]李浚明,朱登云.植物组织培养教程.中国农业大学出版社,2005,(9):345

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