儿童替牙期OPG与RANKL表达水平分析

时间：2022-12-08 18:45:05　来源：柠檬阅读网本文已影响人

况司琦,黄玮，李跃，黄耀文，董雅迪

(1.南昌大学a.研究生院医学部2019级；
b.附属口腔医院特需门诊；
c.研究生院医学部2017级；
d.研究生院医学部2018级，南昌 330006；
2.江西省口腔生物医学重点实验室，南昌 330006；
3.吉林大学口腔医院急诊科，长春 130000)

乳恒牙替换期是儿童颌骨发育、颌建立的关键时期，这一期间出现任何问题都可能导致儿童出现牙列不齐、错颌畸形的现象，影响儿童的咀嚼功能及身心的健康成长[1]。牙齿的萌出是一个长期、复杂且受到多种生物分子严密调控的过程，目前学界对于牙齿萌出过程及其背后的机制尚未完全了解[2]。破骨细胞抑制因子(OPG)是一种可以调节骨吸收且能与肝素相结合的分泌型糖蛋白，是核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的诱饵受体[3]。OPG既可以抑制破骨细胞(OC)的分化又可以抑制骨吸收活性，从而诱导OC的凋亡[4]。RANKL是以OPG为探针找到的配体，是OPG的结合蛋白，通过受体RANK相互作用可诱导破骨细胞形成和骨吸收作用。RANKL与RANK结合后不但能促进OC分化成熟产生骨溶解，还能活化OC，增强其破骨能力[5]。RANKL和OPG之间的平衡状态决定了骨吸收的速度[6]。

有研究[7]表明，在牙齿萌出期间，RANK和RANKL在滤泡中表达；
成年期后，二者在牙周膜中表达。通过采集萌牙期儿童的下颌中切牙牙龈沟液并测定其中OPG、RANKL的含量，可为进一步阐明牙齿萌出过程及其背后的细胞和分子机制提供有价值的参考数据。

1.1 研究对象

随机抽取南昌市区幼儿园和小学各5所，征集5～6岁的萌牙期儿童作为调查对象。选择标准：1)出生于南昌市并有长期居住史；
2)身体健康；
3)牙周状况良好；
4)无代谢相关疾病。最终确定的调查对象共424例。

1.2 分组方法

准备好足量的一次性手套和一次性诊疗盘(内含镊子、口镜、探针)。由检查员在自然光下使用以上检查工具对纳入调查的424名儿童进行口腔检查，记录员对每个儿童下颌中切牙的萌出情况进行记录。根据《儿童口腔疾病预防指南》推荐的标准，将解剖牙冠萌出程度分成3级，其中Ⅱ级和Ⅲ级分别为解剖冠萌出1/2和解剖冠全萌出。依据对象年龄和其解剖牙冠萌出程度，将424例分4组：其中A组和B组分别为5岁、6岁儿童解剖牙冠萌出1/2组，C组和D组分别为5岁、6岁儿童解剖牙冠全萌出组，每组106例。

1.3 取样和检测

取样前嘱受检儿童刷牙。在人工光源下使用无菌干棉球擦干所要取样的牙位并用棉卷隔湿，用探针清除软垢和菌斑，气枪轻吹受检牙面以及相应的牙龈黏膜。将准备好的吸潮纸尖轻轻插入下颌左中切牙或右中切牙唇侧的近中、中点和远中3个位点的龈沟内，遇到阻力后立即停止。停留30 s后取出吸潮纸尖，立即装入已消毒和编号的Eppendoff管中，称重后保存。取样过程中注意避免唾液或血液污染吸潮纸尖，最后样本放置于-70 ℃的冰箱内保存待检。采用ELISA法检测样品中的OPG和RANKL含量(ELISA试剂盒由上海超研生物科技有限公司提供)。

1.4 统计学方法

A组与C组的OPG测定值分别为(246.17±58.87)、(240.12±62.55)mg·μL-1，2组比较差异无统计学意义(P>0.05)；
RANKL测定值分别为(41.79±15.61)、(36.18±12.59)mg·μL-1，2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。B组与D组的OPG测定值分别为(250.18±56.7)、(243.36±65.51)mg·μL-1，2组比较差异无统计学意义(P>0.05)；
RANKL测定值分别为(39.87±14.47)、(37.89±13.52)mg·μL-1，2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。相同年龄不同程度萌出的解剖牙冠其龈沟液中的OPG、RANKL表达水平差异均无统计学意义，但二者表达水平均随着下颌中切牙的萌出而降低。

牙齿萌出是指发育中的牙齿沿着咬合方向朝口腔内移动。萌出过程与牙齿在骨槽窝中的萌出路径有着密切的关系，在此过程中牙胚周围的牙囊可被破骨细胞前体募集、融合和激活进而被吸收。在牙齿萌出的各个阶段，破骨细胞的募集和激活依赖于复杂的信号机制。替牙期儿童乳牙牙根被吸收时，RANKL、OPG由成牙骨质细胞表达。RANKL可启动OC前体细胞，可减缓OC的凋亡，从而加快骨溶解导致骨脆性增大[8]。而OPG主要由成骨细胞(OB)分泌产生，可以抑制OC的活性和功能，并诱导其凋亡，从而防止骨丢失，增加骨密度和骨强度[9]，与RNKP相互拮抗。这提示RANKL/OPG比值可调控骨代谢平衡,调节牙槽骨的吸收和修复，在乳牙的脱落及恒牙萌出的过程中起着至关重要的作用[10-11]。实验结果显示，下颌中切牙在不同萌出阶段，其牙龈沟液中都存在OPG、RANKL，但其含量平均值并不相同。这表明恒牙的主动萌出过程中始终有OPG、RANKL的参与[12-16]。另外，不同受检者其龈沟液中的OPG、RANKL含量也稍有不同，这提示OPG、RANKL含量具有个体差异性。在各年龄组中，解剖牙冠全萌出时，牙龈沟液中OPG、RANKL含量平均值要低于解剖牙冠萌出1/2时的平均值，说明在下颌中切牙主动萌出过程中，其OPG、RANKL含量是不断变化的，很可能受到动态调节。说明他们相互协调，共同控制牙及牙周组织改建，但这与他们的拮抗作用并不相矛盾。

牙齿的萌出是一个漫长且复杂的生理过程，会受到基因和环境的影响，但其背后的萌出机制目前还没有一个明确的答案。该过程有多种细胞的参与，如OB、OC和巨噬细胞等[17-18]。本研究从被检者的牙龈沟液中监测到了OPG、RANKL，证明二者在恒牙主动萌出过程中确实存在。同时，本研究发现，OPG、RANKL表达水平在牙齿萌出过程中出现变化的现象，表明OPG、RANKL可能在乳恒牙替换过程中起重要的调节作用。此外，本研究还发现恒牙解剖冠萌出1/2时其OPG、RANKL表达水平和解剖冠全萌出时有所下降，这是由于RANKL的生物学效应会被OPG抑制[19-21]，说明RANKL/OPG的相对比例对OC的生成具有调节作用。至于不同萌出程度的下颌中切牙其龈沟液中的OPG、RANKL表达水平无显著差异，其具体原因还有待进一步研究。

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儿童替牙期OPG与RANKL表达水平分析

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1.4 统计学方法

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