2022年度无菌操作练习感悟（精选文档）

时间：2022-08-17 17:10:11　来源：柠檬阅读网本文已影响人

下面是小编为大家整理的2022年度无菌操作练习感悟（精选文档）,供大家参考。希望对大家写作有帮助!

无菌操作练习的感悟5篇

【篇1】无菌操作练习的感悟

无菌操作口述

铺无菌盘法（一手一钳，一铺一盖）

尊敬的各位评委老师，大家好，我是一号选手，我要演示的的操作是无菌技术。铺无菌盘法。

操作目的：将无菌巾铺在干燥的治疗盘内，形成无菌区域，放置无菌物品，以供实施治疗时使用。

环境介绍：治疗室环境清洁宽敞明亮，无尘埃，半小时前已停止打扫，无人员走动，定期消毒，符合操作要求，可进行无菌操作。

备清洁干燥的治疗台（手势）一擦治疗台，将抹布裹在手上，一手放背后，依次由远及近，由近及远，擦桌子，擦闭将抹布放于治疗台上，将灰与弯盘一同放于车下。

备清洁干燥的治疗盘（手势）二擦治疗盘，盘内三横，右下，下右。盘底三横，右下，下右。擦毕放于治疗台适当处。

七部洗手法洗手(掌心，指缝，手背，大拇指及虎口，指尖，指关节，手腕)，搓手时间大于15秒，洗手时间大于2分钟，毛巾一用一消毒。戴口罩。

操作开始。

将所需物品依次放到治疗台最边处合理放置。无菌包压手套，纱布罐泡钳桶，卡片笔手表，最后弯盘

取治疗巾包，无菌治疗巾包有效期内，指示胶带已变色，包布无潮湿（摸底），无松散（上提系带），无破损（上下翻看）。可以使用。放在治疗台上解开带子。

开包，压包系带，依次（用手）打开外层包布的外角，左角，右角（左手开左角，右手开右角，不用的手放背后）

无菌持物钳有效期内，指示胶带已变色。打开盖子，指示卡已变色。关上盖子，取出持物钳的手抬高，前段向下垂直，不用的手放背后。

打开外层包布的内角，以持物钳依次打开内层包布外角，左角，右角，内角。从包布上夹下指示卡，指示卡已变色。（打开时不要跨越无菌区，手不要在内层包布上晃来晃去）

夹一块治疗巾，由整端划至毛端，拖行到内层包布边缘，以一手捏着外角，一钳夹着里面一角，外展，同时后退一步，由远及近铺在治疗盘上。

以钳依次还原内层包布内角，右角，左角，外角，以手还原外层包布内角。

无菌纱布罐效期内，指示胶带已变色。打开盖子，指示卡已变色。取纱布一块，投入盘内，半步向前投，投完立刻后退。

打开治疗巾包布内角，钳开内层包布，同法取第二块治疗巾，由近及远铺上，同法依次还原。

将已开启的无菌包一字法还原。

将无菌巾边缘翻折，内--左--外--右。注意手法

书写：无菌包内有无菌治疗巾一块，开包时间2012年？月？日？时？分责任人

无菌盘内备有无菌纱布一块，铺盘时间2012年？月？日？时？分责任人

将标签插在治疗盘与治疗巾之间竖着，插在椅子包扎的后面

（展示无菌盘、无菌包时倾斜45度，持平）无菌包内有无菌治疗巾一块，开包时间2012年？月？日？时？分责任人24小时内有效，放于同类物品前优先使用。

无菌盘内备有无菌纱布一块，铺盘时间2012年？月？日？时？分责任人4小时内有效。

整理用物，无菌包，治疗盘，笔，放回治疗车上。

七部洗手法洗手(掌心，指缝，手背，大拇指及虎口，指尖，指关节，手腕)，搓手时间大于15秒，洗手时间大于2分钟，毛巾一用一消毒。脱口罩。

操作完毕。

注意事项：①铺无菌巾的区域必须清洁干燥。②避免无菌巾潮湿污染。③手及其他有菌物品不可接触无菌巾的内面。④注明铺无菌盘的日期时间，无菌盘有效期不超过4小时。

我要进行的第二个无菌操作是：带无菌手套法。

操作目的：执行无菌操作或接触无菌物品时戴无菌手套，以保护患者，预防感染。

修剪指甲，取下手表。

治疗室环境清洁宽敞明亮，无尘埃，半小时前已停止打扫，无人员走动，定期消毒，符合操作要求，可进行无菌操作。

已备清洁干燥的治疗台。

七部洗手法洗手(掌心，指缝，手背，大拇指及虎口，指尖，指关节，手腕)，搓手时间大于15S洗手时间大于2分钟，毛巾一用一消毒。戴口罩

操作开始。

无菌橡胶灭菌手套？号，符合我的手型，效期内，包装完好，无破损，无漏气，可以使用。

十指紧扣，使手套服帖。

将手套翻边扣套于工作服衣袖外面。

操作完毕，脱手套，应翻转脱下。

医疗垃圾分类处理用物。

再次七步法洗手，洗手时间大于2分钟。

操作完毕。

注意事项：

①戴手套时，应当注意未戴手套的手不可接触手套的外面，戴手套的手不可触及未带手套的手或另一手套的内面。

②戴手套时，如发现有破损，应当立即更换。

③脱手套时，应翻转脱下。

【篇2】无菌操作练习的感悟

无菌操作口述部分（12分钟内操作完成）

1.各位评委老师上午/下午好，我是××号选手。我今天操作的项目是无菌操作，用物已备齐，（经检查均在有效期内）。现在开始操作：

2.评估环境：清洁、宽敞、明亮，操作前30分钟停止清扫工作，减少人员走动，避免尘埃飞扬；

操作台面清洁干燥，操作前用消毒毛巾擦拭操作台面。

3.指甲已修剪（给考官看）：洗手、戴口罩

4.用物评估：1.无菌持物钳：化学指示胶带已变色，在有效期内，可以使用

2.无菌纱布罐（含纱布4快）:化学指示胶带已变色，在有效期内，可使用

3.无菌溶液（看标签）：0.9%Nacl溶液250ml，在有效期内；
瓶盖无松动，瓶身瓶底无裂缝；
对光检查，溶液无浑浊、沉淀、变质、絮状物；
可以使用

4.棉签：挤压无漏气，在开包有效期内

5.碘伏：在开瓶有效期内

6.无菌手套（2副）:6.5号/7号/7.5号无菌手套，包装完好，挤压无漏气，在有效期内，可以使用

7.无菌治疗碗包：化学指示胶带已变色，（翻转包布）包布无潮湿，无破损，在有效期内，可以使用

8.无菌治疗巾包：同上

9.弯盘：清洁干燥

10.治疗盘：清洁干燥

另备：记录笔，纸

无菌操作3个记录：

1.无菌治疗巾包原折痕“一字”包好后，看时间，记录：日期、时间、并签名（口述：有效期24h）

2.无菌溶液盖回瓶盖后，看时间，记录：日期、时间、并签名（口述：有效期24h）

3.无菌盘铺好后，看时间，记录：日期、时间、并签名（口述：有效期24h）

记录格式：2017/10/31 16：00 某某

【篇3】无菌操作练习的感悟

无菌技术操作原则概述

　　在护理中，控制致病微生物，避免发生感染的最好办法是无菌技术。护/士需要把临床护理中无菌技术的理论和实践运用于护理中，减少病人感染的发生，提高护理服务的质量。

无菌技术概念

　　无菌技术是指在执行医疗护理操作的过程中，防止一切医微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。

　　1.无菌技术是指在执行医疗、护理技术过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。

　　2.无菌物品经过物理或化学方法灭菌后，未被污染的物品称无菌物品。

　　3.无菌区域经过灭菌处理而未被污染的区域，称无菌区域。

　　4.非无菌物品或区域未经灭菌或经灭菌后被污染的物品或区域，称非无菌物品或区域。

无菌技术操作原则

1、环境要清洁。

　　进行无菌技术操作前半小时，须停止清扫地面等工作，避免不必要的人群流动，减少人员走动，以降低室内空气中的尘埃。防止尘埃飞扬。

2、工作人员进行无菌操作

　　衣帽穿戴要整洁。帽子要把全部头发遮盖，口罩须遮住口鼻，并修剪指甲，洗手。

3、物品管理

　　无菌物品与非无菌物品应分别放置，无菌物品不可暴露在空气中，必须存放于无菌包或无菌容器内，无菌物品一经使用后，必须再经无菌处理后方可使用，从无菌容器中取出的物品，虽未使用，也不可放回无菌容器内。

4、无菌物品

　　无菌物品必须存放于无菌包或无菌容器内，无菌包应注明无菌名称，消毒灭菌日期，有效期一周为宜，并按日期先后顺序排放，以便取用，放在固定的地方。无菌包在未被污染的情况下，可保存7-14天，过期应重新灭菌。无菌物品一经使用或过期，潮湿应重新进行灭菌处理。

5、取无菌物

　　操作者身距无菌区20cm，取无菌物品时须用无菌持物钳（镊），不可触及无菌物品或跨越无菌区域，手臂应保持在腰部以上。无菌物品取出后，不可过久暴露，若未使用，也不可放回无菌包或无菌容器内。疑有污染，不得使用。未经消毒的物品不可触及无菌物或跨越无菌区。

6、进行无菌操作时

　如器械、用物疑有污染或已被污染，即不可使用，应更换或重新灭菌。

7、一物一人，一套无菌物品，只能供一个病员使用，以免发生交叉感染。

8、任何情况下，不得用嘴吸取菌液

无菌技术的基本操作

目的

　　取用、放置、保存无菌物品符合无菌操作原则，保证无菌物品和无菌区域不被污染。防止病原微生物侵入或传播给他人。

评估

1.着装整洁，

　　洗手，戴口罩，更换圆帽。

2.操作环境：

　　操作区域是否整洁、宽敞、安全；
操作台是否清洁、干燥、平坦。

3.无菌物品

　　无菌物品存放是否合理，是否在有效期内。

用品

治疗盘内置：

无菌持物钳浸泡于消毒液中、无菌治疗巾、无菌储槽、无菌液体、无菌纱布罐、无菌棉签、无菌手套包、治疗盘、2%碘酒、70%酒精、纸、笔、纱布、启瓶器、弯盘。

要点：

　 ①杀死规定作业系统（如试管、三角瓶和培养皿）中的一切微生物，使作业系统变成无菌；
②在作业系统与外界的联系之间隔绝一切微生物穿过（如用火焰封闭三角瓶和试管等的开口,用棉花过滤空气、用滤器过滤水等）;③在无菌室、超净操作台或空气流动较小的清洁环境中，进行接种或其他不可避免的敞开作业，防止不需要的微生物侵入作业系统

内容

　　1.检查无菌治疗巾的有效日期，解开系带并缠好，按顺序逐层打开。

　　2.用无菌持物钳夹取无菌治疗巾一块放入治疗盘内。

　　3.使用无菌持物钳时保持钳端向下，不可倒举向上，用后立即放回。

　　4.取放无菌持物钳时，钳端应闭合，不可触及容器液面以上部分。

　　5.未用完的无菌治疗巾，应按原折折好系带，注明开包日期与时间。（口述：有效期为24小时）

　　6.找到治疗巾最外侧边缘，打开铺成半铺半盖。

　　7.上层半幅反折三折到对面，开口处向外，露出无菌区。

　　8.打开无菌储槽，用持物钳夹取一个弯盘，再夹取一块纱布放进弯盘内，放回持物钳。

　　9.将上层无菌巾盖好，边缘对齐，并将开口处向上反折两次，两侧边缘向下反折一次，注明铺盘日期与时间。（口述：有效期为4小时）

　　10.用纱布擦去无菌液体上的尘土，仔细检查核对溶液后，撬去铝盖，两手拇指将瓶盖边缘向上翻起松动。

　　11.用无菌持物钳在无菌储槽内夹取无菌治疗碗，应托其底部，手不能触及其内侧及边缘放下。食指和中指套住皮塞拉出，手不能触及瓶口及盖的内面。

　　12.手握瓶签，先倒出少许溶液冲洗瓶口（倒入弯盘内），再由原处将溶液倒入治疗碗内。

　　13.如有剩余液体，常规消毒瓶塞后翻下。

　　14.注明开瓶日期与时间。（口述：有效期为24小时）

　　15.检查无菌手套外面的号码及有效日期，解开系带并打开无菌手套包。

　　16.检查手套放置的位置无误后，取滑石粉涂擦在两手掌和手背之间，剩余的不再放回手套包内。

　　17.一手掀起口袋开口处，另一手捏住手套翻折部分（手套内面），取出手套对准五指戴好。

　　18.未戴手套的手掀起另一开口处，用已戴好手套的手，插入另一手套的翻边内面（手套外面）对准五指戴好。

　　19.将手套的反折边套在工作服袖上。（检查手套有无破损、漏洞，擦去手套上的滑石粉）

　　20.操作完毕，（口述：用清水洗净手套上的污物和血渍），脱去手套，第一只脱去外侧面，第二只脱去内侧面。

　　21.分类整理用物，洗手后放回保留物品。

　　22. 口述无菌操作的基本原则。

注意事项

　　1.使用无菌持物钳时保持钳端向下，不可倒举向上，用后立即放回。取放无菌持物钳时，钳端应闭合，不可触及容器液面以上部分。如用无菌持物钳取远物时，应连同镊子筒移至无菌物品旁使用。

　　2.不能在无菌容器上方翻转容器盖，防止污染容器内物品。

　　3.无菌物品一经取出，即使未用，也不可再放回。

　　4.打开无菌包内，手不能触及无菌巾的内侧面，不可跨越无菌区。

　　5.倒溶液时，勿使瓶口接触容器口边缘。

　　6.戴手套时不可强拉，最后将两手套反折面套在工作衣袖外面。

　　无菌物品的保管

　　1.无菌物品和非无菌物品应分别放置。

　　2.无菌物品必须存放那个在无菌容器或无菌包内，无菌包外要注明物品的名称、灭菌日期，物品按日期先后顺序放置。

　　3.定期检查无菌物品保存情况，无菌包在为污染的情况下，保存期一般以7天为宜，过期或包布受潮应重新灭菌。

无菌物品的保管原则：

　　无菌物品的管理应按医院内部规定进行。所有无菌物品要标明灭菌日期与灭菌标记，和非无菌物品分开放置，无菌物品要放置在干燥清洁的屋子内，放置无菌物品的容器要定期消毒；
各类无菌物品应有规定的存放地点，每天检查。通常一块双层包布的无菌包在没污染的情况下可保持7d，用密闭的包装纸或者塑料袋可保持半年或者一年；
存放无菌干棉球、棉签和盐水棉球等没有消毒液在内的容器，要每天灭菌。

【篇4】无菌操作练习的感悟

无菌操作原则

2008-6-23 15:4　【大中小】【我要纠错】

　　1、环境要清洁，进行无菌操作前半小时，须停止清扫地面等工作。避免不必要的人群流动，防止尘埃飞扬。治疗室应每天用紫外线消毒一次。

　　2、进行无菌操作时，衣帽穿戴要整洁。帽子要把全部头发遮盖，口罩须遮住口鼻，并修剪指甲、洗手。

　　3、无菌物品与非无菌物品应分别放置。无菌物品不可暴露在空气中，必须放于无菌包或无菌容器内，无菌物品一经使用后，必须再经灭菌处理后方可使用。从无菌容器中取出的无菌物品，虽未使用，也不可放回无菌容器内。

　　4、无菌包应注明物品的名称、消毒灭菌日期，并按日期先后顺序排放，以便取用，放在固定的地方。无菌包在未污染的情况下，可保存7-14天，过期应重新灭菌。

　　5、取无菌物品时，必须用无菌持物钳（镊）。未经消毒的用物不可触及无菌物或跨越无菌区。

　　6、进行无菌操作时，如器械、用物疑有污染或已被污染，即不可使用，应更换或重新灭菌。

　　7、一份无菌物品，只能供一个病员使用，以免发生交叉感染。

无菌操作注意事项：

1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %

ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每

次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间

污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间

隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。

2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可

以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦

拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操

作。

3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打

开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，

尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒

感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程

中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐

针头之伤害等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力

5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。

5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300

小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。

6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水

植物外植体消毒和接种：

用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组织培养中，外植体如果是带菌的，在接种前都必须进行表面消毒，这是取得培养成功的最基本的和重要的前提。常用消毒剂对外植体进行消毒。从室外取的材料，一般先用自来水冲洗数分钟，对表面不光滑或长有绒毛等结构不容易洗净的材料，自来水冲洗的时间要长，几个小时或过夜，并且用洗衣粉或洗洁精洗涤，必要时用毛刷刷洗。洗后的材料用滤纸擦干，然后浸泡在消毒溶液中。接种材料使用消毒剂后，要用无菌水洗涤3～5 遍，最后用无菌纸擦干净。使用消毒剂的原则是既要达到消毒目的，又不能损伤植物组织和细胞，还要符合就地取材的原则。对一些容易污染、较难灭菌的外植体进行表面消毒时，用单一消毒剂不能收到好的效果，所以常选用两种消毒剂交替浸泡法。一般，首先用75％乙醇浸泡外植体数秒钟至30s，然后置于0.1％氯化汞溶液5～10min 或含有2％活性氧的次氯酸钠溶液5～30min，然后用无菌水洗涤。有时在氯化汞或次氯酸钠灭菌后，用无菌水洗，进一步剥去几层组织或器官如叶片后，再用次氯酸钠灭菌3～5min，无菌水漂洗3 次后，切割、用于接种。

用消毒剂对接种材料进行灭菌处理时，可以在灭菌溶液中加入1～2 滴表面活性剂，如吐温80或吐温20，它们可以湿润外植体整个组织，促进灭菌液充分接触表面组织，达到较好的消毒效果。有时还可以用磁力搅拌、超声振动等方法使消毒杀菌剂进入外植体。消毒溶液对外植体消毒是在超净工作台上进行。完成表面消毒的接种材料要尽快放置于培养基中。

植物外植体消毒和接种(以胡萝卜为例)：

1 ．接种前，用75 ％乙醇棉球或用2％苯扎溴铵溶液擦拭超净工作台台面，将培养基及用具放入工作台，开超净工作台紫外灯照射至少20 min，然后开送风开关，之后关闭紫外灯，通风10 min后，再开日光灯进行无菌操作。

2 ．将胡萝卜块根在自来水下冲洗干净，用小刀切去外围组织，切成小块分别放100 mL 烧杯中，用75％乙醇溶液浸泡30s，然后用0.1%氯化汞溶液分别浸泡2 、5 、10 min ，用无菌水洗涤3 次，无菌纸吸干水分。取出培养皿，剪刀和镊子使用前插入90％乙醇溶液中，使用镊子时在酒精灯火焰上炽烧片刻，冷却后，切取髓部组织0.5cm 。以上操作都要在试管口靠近火焰旁。

3 ．将培养容器斜面向上，并使它们拉于水平位置，也可将培养容器放在左手中。将塞盖用右手拧转松动，以便接种时拔出。用火焰灼烧管口，灼烧时应不断转动试管口（靠手腕的动作，使试管口沾染的少量菌得以烧死）。将烧过的接种针（环）触动培养基部分，使其冷却，以免烧死被接种的外植体，然后轻轻接触外植体，慢慢将接种针（环）抽出试管，打开培养容器盖，将外植体放在培养基上，每瓶放3 块。封口，贴标签，注明姓名，标明时间和材料名称。整理好接种室（箱）的台面，搞好清洁卫生。

4 ．用水洗干净非洲澎蜞菊叶片，用滤纸擦干后置于100 mL 烧杯中，在超净工作台上加入75％乙醇溶液浸泡30s，然后用0.1％氯化汞溶液浸泡3 、5 、7 min，用无菌水洗涤3 次，将叶片切成长1cm ,按照上述同样的步骤接种于培养基上。

5 ．绿豆种子用75％乙醇溶液浸泡30 s，然后用0.1％氯化汞溶液（加入吐温2 滴）浸泡3 、5 、10 min ，期间不断搅拌溶液，用无菌水洗涤5～6 遍，洗干种子外围水分，按照上述同样的步骤接种于培养基上。

无菌操作原则：

　　一、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。

　　二、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。

　　三、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。

[无菌操作间]

无菌操作间

四、进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。

　　五、无菌物品必须保存在无菌包或灭菌容器内，不可暴露在空气中过久。无菌物与非无菌物应分别放置。无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。凡已取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。

　　六、无菌包应按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内，并保持清洁干燥，与非灭菌包分开放置，并经常检查无菌包或容器是否过期，其中用物是否适量。

　　七、无菌盐水及酒精、新洁尔灭棉球罐每周消毒一次，容器内敷料如干棉球、纱布块等，不可装得过满，以免取用时碰在容器外面被污染。

原则及注意事项

无菌操作原则：

　　一、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。

　　二、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。

　　三、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。

无菌操作间

四、进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。

　　六、无菌包应按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内，并保持清洁干燥，与非灭菌包分开放置，并经常检查无菌包或容器是否过期，其中用物是否适量。

　　七、无菌盐水及酒精、新洁尔灭棉球罐每周消毒一次，容器内敷料如干棉球、纱布块等，不可装得过满，以免取用时碰在容器外面被污染。

无菌操作技术及注意事项

1、玻璃器皿的消毒和清洁　　⑴新购玻璃器皿的处理新购玻璃器皿应用热肥皂水洗刷，流水冲洗，再用1%～2%盐酸溶液浸泡，以除去游离碱，再用水冲洗。对容量较大的器皿如试剂瓶、烧瓶或量具等，经清水洗净后应注入浓盐酸少许，慢慢转动，使盐酸布满容器内壁数分钟后倾出盐酸，再用水冲洗。

　　⑵污染玻璃器皿的处理　　①一般试管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%石炭酸浸泡，再煮沸30分钟，或在3%～5%漂白粉澄清液内4小时，有的亦可用肥皂或合成洗涤剂洗刷使尽量产生泡沫，然后用清水冲洗至无肥皂为止。最后用少量蒸馏水冲洗。

　　②细菌培养用的试管和培养皿可先行集中，用1kg/cm2高压灭菌15～30分钟，再用热水洗涤后，用肥皂洗刷，流水冲洗。

　　③吸管使用后应集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小时，逐支用流水反复冲洗，再用蒸馏水冲洗。

　　④油蜡沾污的器皿，应单独灭菌洗涤，先将沾有油污的物质弃去，倒置于吸水纸上，100℃烘干半小时，再用碱水煮沸，肥皂洗涤，流水冲洗。必要时可用二甲苯或汽油去油污。

　　⑤染料沾污的器皿，可先用水冲洗，后用清洁或稀盐酸洗脱染料，再用清水冲洗。一般染色剂呈碱性，所以不宜用肥皂的碱水洗涤。

　　⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡，取出后流水冲洗，再用肥皂或弱碱性煮沸，自然冷却后，流水冲洗。被结核杆菌污染或不易洗净的玻片，可置于清洁液内浸泡后再冲洗。

　　2、无菌器材和液体的准备将玻璃器具中的培养皿、培养瓶、试管、吸管等按上述方法洗净烘干后，用一洁净纸包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，装入干净的铝盒或铁盒中，于120℃的干燥箱中干燥灭菌2小时，取出备用。对于手术器械、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液，则采用高压蒸气灭菌法，即在15磅的条件下，加热20分钟。而对于MEM培养液、小牛血清和消化液等需用G5或G6滤器负压抽滤后使用。

　　3、无菌操作过程在无菌操作过程中，最重要的是要保持工作区的无菌、清洁。因此，在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，并认真洗手和消毒。在操作时，严禁喧哗，严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的止血钳、镊子等。培养瓶应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。对于吸管应先用手拿后1/3处，戴上胶皮乳头，并用酒精灯烧烤之后再吸液体。

　　4、常用清洁液的配制法⑴重铬酸钾清洁液：可根据不同需要，选用下列的任何一种浓度。先将重铬酸钾溶于水中，再慢慢加入浓硫酸。注意，此时可产生高热，应防止容器破裂。重铬酸钾清洁液除污力强，腐蚀性大，应避免接触皮肤和衣服。为防止吸收空气的水分而变质，此液应贮存于带盖的容器中。如清洁效力较差，可再加入少量重铬酸钾及浓硫酸，还可继续使用。直到液体变蓝绿色，即不能再用。配制重铬酸钾清洁液时，宜用耐高温的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器。使用玻璃器皿时，应特别注意防止产生高热而破裂，切忌用量筒来配制。

　　⑵磷酸三钠将其配成5%～10%水溶液，可用于洗涤玻璃器皿上的油污，但经常使用腐蚀玻璃，使器皿表面模糊、毛糙。

　　⑶硝酸清洁液将其配成50%水溶液，可用于清洁微量滴定筒。⑷乙二胺四乙酸二钠（EDTA钠盐）将其配成5%～10%水溶液，可洗脱粘附于玻璃器皿内壁的白色沉淀物。⑸尿素溶液尿素是溶解蛋白质的良好溶剂，适用于洗涤粘附有血液血清等蛋白质的吸管、试管等。

无菌操作法

2007-10-24 17:23　【大中小】【我要纠错】

　　无菌操作法，是整个过程控制在无菌条件下进行的一种操作方法。某些药品加热灭菌后发生变质、变色或降低含量者可采用无菌操作法制备。此种无菌操作，不仅用于注射剂而且对其它的如滴眼剂、海棉剂等用于粘膜和创伤的制剂也均适用。无菌操作室或无菌操作所用的一切用具、材料以及环境，均须应用面所述灭菌法灭菌，操作须在无菌操作室或无操作柜内进行。

　　（一）无菌操作的空气灭菌可应用上节《气体灭菌法》中所述的甲醛、丙二醇、乳酸、三甘醇等。其具体用法不再赘述。药厂大型无菌操作，常用甲醛溶液加热熏蒸进行空气灭菌。将甲醛溶液放入瓶内，逐渐被吸收蒸气夹层加热锅中，甲醛溶液被加热，甲醛蒸气经气出口送入总进风道，由鼓风机吹入无菌操作室，连续3小时后，一般即可将鼓风机关闭。室温应保持25℃以上，以免室温过低甲醛蒸氯了聚合而附着于冷表面，湿度应保持60％以上，密闭熏蒸12－24小时以后，再将25％氨水加热（每m3用8－10ml），从总风道送入氨气约15分钟，以吸收甲醛蒸气，然后开启总出口排风，并通入经处理过的无菌空气直到室内无臭气为止。

　　除用上述方法定期进行较彻底的灭菌外，还要对室内的空间、用具（桌椅等）、地面、墙壁等，用3％酚溶液、2％煤酚皂溶液、0.2%新洁而或75％酒精喷洒或擦试。其它用具尽量用热压灭菌法或干热灭菌法灭菌。每天工作前开启外线一小时，中午休息时间也要开1／2－1小时。

　　（二）无菌操作操作人员进入操作之前要洗澡并换上已经灭菌的工作服和清洁的鞋子，不使头发、内衣等露出来，以免造成污染机会。安瓿要150－180℃2－3小时干热灭菌。橡皮塞要以121℃1小时热压灭菌。有关器具、机器都要经过灭菌。用无菌操作法制备的注射剂，大多要加入抑制。医学教育网搜集整理

　　小量无菌制剂的制备，也可在无菌操作柜中进行。无菌操作柜分小型无菌操作与联合无菌无操作两种小型无菌操作柜又称单人无菌柜。式样有单面式与双面式两种。操作柜的架子用木制，四周配以玻璃，前面操作下装木板，挖二圆孔，孔内密接橡皮手套或袖套。药品及用具等，由侧门送入柜内后关闭。操作时可完全与外界空气隔绝。柜内空气的灭菌，可在柜中央上方装一小型紫外线灯，使用前1小时启灯灭菌，或用药液（如3％酚溶液）喷雾灭菌。联合无菌操作柜是由几个小型操作柜联合制成，以使原料的精制，传递分装及成品暂时存放等工作全部在柜内进行。近年来，采用层流洁净工作台作无菌操作，使用方便，效果可靠。

意义

无菌是指在环境中一切有生命活动的微生物的营养细胞及其芽孢或孢子都不存在的状态。在微生物实验中，操作的目的在于防止待接种细菌被杂菌污染。只有在培养基、实验器皿等处于无菌的前提下，才能保证菌种不被污染。

接种细菌时，应注意以下几项：

（1）在超净工作台上操作，工作台在使用前要紫外消毒，酒精消毒等

（2）应在酒精灯火焰前操作

（3) 取菌种前灼烧接种针或接种环（要烧红）

（4）烧红的接种针（环）稍事冷却再取菌种，以免烧死菌种

（5）接种后应尽快塞上棉塞

总之，一句话，尽可能防止杂菌污染！！！！