青岛地区成年人血清和尿液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白参考值范围的初步建立
时间：2023-06-20 18:25:07 来源：柠檬阅读网 本文已影响 人 
宋海燕 刘晓莉 李化会 原江水 高成磊 刘丰海
(1 青岛大学附属青岛市市立医院检验科，山东 青岛 266071；
2 青岛大学医学部)
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是一种小分子量细胞外分泌蛋白，是脂质运载蛋白家族的重要成员。目前NGAL在炎症、肿瘤及缺血等发病机制的相关研究中备受关注[1-3]。根据研究报道，NGAL可以作为急性肾损伤(AKI)的早期诊断标志物[4-5]以及慢性肾脏病的可靠监测指标[6]。此外，NGAL升高对糖尿病肾病、狼疮性肾病和心力衰竭等疾病的诊断也同样具有重要意义[7-9]。然而国内对NGAL参考值范围的研究较少，其检测方法也不尽相同，在临床上没有统一的标准，难以应用和推广。本研究根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)文件C28-A3《医学实验室参考区间的定义、建立和确认》[10]要求，通过检测青岛市市立医院体检健康成年人血清和尿液中NGAL水平，分析其在不同年龄段间和性别间的差异，尝试建立本实验室血清和尿液中NGAL的参考值范围，为临床疾病的诊断、监测和预后判断提供依据。
选取2019年1-6月在青岛市市立医院进行健康体检的332例成年人作为研究对象，其中男163例，女169例。纳入标准：①血常规、尿常规、红细胞沉降率、C-反应蛋白、血糖、血脂及肝功能指标正常者；
②肾功能相关指标肌酐、尿素氮、尿酸、胱抑素c、β2微球蛋白、尿白蛋白/肌酐比值正常者；
③1个月内未服用任何肾毒性药物者。排除标准：①高血压、糖尿病、心脑血管疾病、肾脏和肝脏疾病、炎症和肿瘤等患者；
②妊娠、哺乳、BMI>30 kg/m2的肥胖者等。将研究对象按年龄段20～29、30～39、40～49、50～59、≥60岁分为5组；
同时按照性别不同分为男性组和女性组。所有研究对象的血清和尿液中NGAL水平均于清晨空腹时检测。
2.1 不同性别间血清和尿液中NGAL水平比较
在332例研究对象的检测指标中均未发现离群值。各检测结果经Kolmogorov-Smirnov检和Q-Q图检验，研究对象血清中NGAL水平呈近似正态分布(P>0.05)，而尿液中NGAL水平则呈非正态分布(P<0.01)，分别经独立样本t检验和Mann-WhitneyU检验，血清中NGAL水平男性组明显高于女性组，而尿液中NGAL水平男性组明显低于女性组(t=2.099、Z=-2.341，P<0.05)。见表1。
2.2 不同年龄段间血清和尿液中NGAL水平比较
经单因素方差分析，男性和女性血清中NGAL水平在不同年龄段间的差异均无统计学意义(P>0.05)，但男性和女性血清中NGAL水平随年龄的增长均呈缓慢升高的趋势；
经Kruskal-WallisH检验，男性和女性尿液中NGAL水平不同年龄段间差异均无统计学意义(P>0.05)，男性尿液中NGAL水平随年龄的增长呈逐渐升高趋势,而女性尿液中NGAL水平随年龄的增长呈降低趋势。见表2。
表2 不同年龄段间血清和尿液中NGAL水平的比较(ρ/μg·L-1)
2.3 血清中NGAL水平的参考值范围
血清中NGAL水平呈近似正态分布，且在不同性别间的差异有统计学意义，在年龄分组间的差异无统计学意义，因此需要根据性别建立参考值范围，年龄不予考虑。经计算，成人血清中NGAL水平的参考值范围男性为70.11～181.13 μg/L,女性为59.35～176.79 μg/L。见表3。
2.4 尿液中NGAL水平的参考值范围
由于尿液中NGAL水平在人体病理状态下处于升高状态，故参考值范围只设置上限，采用单侧95%CI作为参考值范围，且尿液中NGAL水平呈非正态分布，所以用P95表示参考值范围上限。鉴于尿液中NGAL水平在不同性别间的差异有统计学意义，但是在年龄分组间的差异无统计学意义，因此需要根据性别建立参考值范围上限，年龄不予考虑。经计算成人尿液中NGAL水平参考值范围为男性<42.49 μg/L,女性<82.66 μg/L。见表3。
表3 青岛地区健康成年人血清和尿液中NGAL水平参考值范围(ρ/μg·L-1)
NGAL是一种含有198个氨基酸序列的分泌性糖蛋白，又称为脂质运载蛋白-2(LCN2)，其三级空间结构由N端310-螺旋、C端α螺旋和中间保守的8链β-桶状结构共同构成[11]。研究发现，NGAL在体内以单体、同源二聚体和异二聚体3种分子形式存在。其中，NGAL的同源二聚体可在人中性粒细胞中与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)共价结合[12]。在正常情况下，NGAL主要由粒细胞成熟过程中早期的髓细胞合成和分泌，外周血中的成熟粒细胞低水平表达NGAL；
而在病理条件下，NGAL主要由免疫细胞、肾小管细胞和肝细胞分泌，呈高表达[11]，如AKI早期，肾小管损伤大量分泌NGAL，导致血清和尿液中NGAL水平短时间内急速升高[4-5]，可以作为AKI早期的诊断依据。此外，NGAL在肿瘤、感染以及心脑血管等疾病的诊断方面也具有重要价值[13-16]。
检测NGAL水平的常用方法包括乳胶增强免疫比浊法、酶联免疫吸附法(ELISA)、荧光免疫层析法和化学发光免疫分析法等。ELISA法操作简便，可得到定量或定性结果，但操作过程中影响因素较多；
荧光免疫层析法测定速度快，但检测样本量有限；
化学发光免疫分析法可自动化操作，灵敏度高，但试剂稳定性差；
本试验选用的乳胶增强免疫比浊法可同时检测血液和尿液标本，稳定性和重复性均较好，可尝试作为NGAL参考值范围建立的标准检测方法。
本研究结果显示，血清和尿液中NGAL在不同性别间的差异均有统计学意义，且男性和女性血清中NGAL水平随年龄的增长均呈缓慢升高趋势。男性尿液中NGAL水平随年龄的增长也呈现升高趋势，但女性尿液中NGAL水平随年龄的增长呈降低趋势，可能因为其分泌与性别相关机体老化(如肾功能生理性下降)有一定关系，具体原因有待进一步探究。此外，男性和女性尿液中NGAL水平在不同年龄段间的差异均无统计学意义。徐鹏等[17]报道成年人血清中NGAL水平存在性别差异而无年龄差异，这与本研究结果基本一致。而刘梦婕等[18]提出健康人群血清中NGAL水平存在年龄差异，而无性别差异。国外有报道指出，体检健康人群血清和尿液中NGAL水平在性别间的差异有统计学意义，且尿液中NGAL水平在不同年龄段间也存在一定差异[8,19]。本试验结果与以往试验结果稍有不同，一方面是检测方法学的不同，上述国外试验采用ELISA法检测，而本试验采用乳胶增强免疫比浊法检测，方法学上灵敏度的差异会导致检测结果不一致的情况；
另一方面NGAL分布水平可能与标本类型选择、饮食、种族及地域等因素相关[8,17-20]。
本研究通过对数据分析，建立了本实验室的血清中NGAL水平参考值范围，其中男性为70.11～181.13 μg/L,女性为59.35～176.79 μg/L，其上限稍高于国内(男性：52.7～156.3 μg/L，女性：54.3～148.6 μg/L)和国外(男性：38.7～157.6 μg/L，女性：24.4～142.5 μg/L)的研究报道的结果[17-18]。本实验室尿液中NGAL水平的参考值范围为：男性<42.49 μg/L，女性<82.66 μg/L，此研究结果明显低于CULLEN等[20]的试验结果(男性<91 μg/L，女性<129 μg/L)，但是男性尿液中NGAL水平参考值范围上限与MAKRIS等[21]的研究结果(男性<49.41 μg/L)相近。以上各试验结果的差异，排除方法学和生物学特性影响，考虑与NGAL 3种分子形式有关系，检测体系内可能存在一种或同时存在几种分子形式，致使检测结果出现差异。
参考值范围是规范实验操作、解释检验结果和指导临床诊疗工作的重要依据，尤其是新项目的开展与检测会受到多种因素的影响。因此，不同实验室有必要建立自己的参考值范围，以更好地满足临床需要。本研究对青岛地区332例体检健康成年人的血清和尿液中NGAL水平进行了检测和统计分析，初步建立了适合本地区成年人的参考值范围。此外，本研究为单中心、小样本量研究，所以此参考值范围建立后，还需继续扩大样本量或通过其他医疗机构对本研究结果进行验证。
利益冲突声明：所有作者声明不存在利益冲突。
ConflictsofInterest: All authors disclose no relevant conflicts of interest.
伦理批准和知情同意：本研究涉及的所有试验均已通过青岛市市立医院医学伦理委员会的审核批准(文件号ZYZJJ20180623)。所有试验过程均遵照《全国临床检验操作规程》的条例进行。受试对象或其亲属已经签署知情同意书。
EthicsApprovalandPatientConsent: All experimental protocols in this study were reviewed and approved by The Medical Ethics Committee of Qingdao Municipal Hospital(Approval Letter No.ZYZJJ20180623), and all experimental protocols were carried out by following The National Guide to Clinical Laboratory Procedures.Consent letters have been signed by the research participants or their relatives.
作者贡献：宋海燕、李化会和刘丰海参与了研究设计；
宋海燕、刘丰海、刘晓莉、原江水和高成磊参与了论文的写作和修改。所有作者均阅读并同意发表该论文。
Contributions: The study was designed bySONGHaiyan,LIHuahui, andLIUFenghai.The manuscript was drafted and revised bySONGHaiyan,LIUFenghai,LIUXiaoli,YUANJiangshui, andGAOChenglei.All the authors have read the last version of the paper and consented submission.
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