清肺化痰通络方对肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达的影响_基质金属蛋白酶
时间：2019-04-10 03:28:10 来源：柠檬阅读网 本文已影响 人 
[摘要] 目的 探讨清肺化痰通络方对博莱霉素A5（BLMA5）所致肺纤维化大鼠的干预作用及可能机制。 方法 将Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、干预组。模型组和干预组通过气管插管灌注BLMA5复制大鼠肺纤维化模型，对照组给予等量生理盐水气管灌注；对照组和模型组给予生理盐水灌胃，干预组给予清肺化痰通络方药物灌胃。灌胃后3、7、14、28 d分别处死大鼠，采用HE和Masson染色观察肺组织病理变化，免疫组化染色检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、 MMP-9在肺组织的表达水平。 结果 清肺化痰通络方能显著改善大鼠的一般身体状况，减轻肺泡炎及肺纤维化的程度。干预组和模型组肺内MMP-2表达在第14天达到高峰，MMP-9的表达在第7天达到高峰，且两组同时期MMP-2、MMP-9的表达均高于对照组（P ＜ 0.05）；干预组MMP-2、MMP-9表达低于同时期模型组 （P 2.2 三组MMP-2和MMP-9蛋白表达比较
对照组肺组织中可见MMP-2少量阳性表达，主要分布在肺泡巨噬细胞、肺泡上皮细胞、成纤维细胞和气道上皮细胞胞浆内。模型组、干预组第3天时，肺内MMP-2阳性表达细胞均多于对照组，肺泡间隔内可见少量成纤维细胞呈阳性反应，血管、支气管周围及肺泡腔镜下内可见大量单核巨噬细胞呈强阳性反应，三组间比较，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；第7天模型组和干预组MMP-2表达明显增强，可见大量肺泡巨噬细胞和间质内的成纤维细胞呈阳性表达； 第14天模型组和干预组肺内阳性细胞表达最强，与第3、7、28天比较，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；第28天时，模型组和干预组阳性细胞较同组第14天时明显减少，但仍高于对照组。见表2。
对照组肺内可见MMP-9少量弱阳性表达，表达主要分布于肺胞巨噬细胞和支气管上皮细胞。第3天时模型组、干预组大鼠肺内血管、支气管周围及肺泡腔内的单核巨噬细胞呈强阳性反应，与对照组比较，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；第7天模型组和干预组肺内MMP-9表达增强，除支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞外，还见大量间质内的成纤维细胞和肺泡巨噬细胞呈阳性表达，与同组第3、14、28天比较，差异有高度统计学意义（P ＜ 0.01）；第14天模型组和干预组肺内阳性细胞略有减少；第28天模型组和干预组MMP-9表达较第7天时明显减弱，但仍高于对照组（P ＜ 0.05）。干预组阳性细胞明显少于同时段模型组，两组间差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。见表2。
3 讨论
现代医家根据肺纤维化临床表现及病机变化将其归为咳嗽、肺胀、喘证、气短、肺痿、肺痹、痰饮等范畴，正气亏虚为本，血瘀内阻为标，正虚邪实为其基本病机，其中，痰阻肺络、肺阴不足、瘀血阻滞、内闭喘脱为临床多见的病变类型。消肿化痰通络方中黄芩、瓜蒌为君药，黄芩味苦寒主入肺经，可泻火解毒，治肺热所致咳吐黄痰；瓜蒌药味甘、微苦，性寒，归肺、胃、大肠经，清热化痰，宽胸散结、痛疮肿毒，两者相伍则肺之热清痰化而气机调畅；鱼腥草味辛，性微寒，归肺经具有清热解毒、消痈排脓功效，肺萎之人久咳入络，必兼气虚血瘀，故以地龙、桃仁活血化瘀、通络，且地龙性寒味咸，善下行可平抑上逆之肺气而止咳平喘；佐以黄芪、当归养血补气，与君药相配，苦寒、甘温并用，使肺热得清而不伤肺津，共奏清热化痰、止咳平喘、活血益气之功。
实验结果显示，造模大鼠均有不同程度的耸毛、活动减少、嗜睡，少吃等症状。造模初期可见大鼠体重明显下降，约3 d后逐渐缓解，其中，干预组体重恢复较快，第28天时体重已与空白对照组相近，而模型组体重恢复较慢，第28天时仍明显低于对照组。通过HE光镜观察模型组早期即出现肺泡炎，14 d后以肺纤维化病变为主，28 d出现典型的肺纤维化改变，符合肺纤维化的病理改变过程[3]，提示造模成功。干预组肺泡炎程度明显的轻于模型组，提示清肺化痰通络方可以减轻早期肺泡炎的改变，第14、28天干预组肺纤维化程度轻于同时段的模型组。提示清肺化痰通络方可以减轻模型动物的症状，并在肺组织结构上减轻和延缓纤维化的发生。
组织纤维化的发生是由于ECM代谢失衡，打破了脏器原有的组织结构，纤维结缔组织大量增生的结果[4]。ECM包括纤维性成分、连接蛋白和间质成分，主要为糖胺聚糖等，其对细胞增殖和分化发挥重要调控作用，合成和降解这些蛋白质的ECM代谢酶可分为基质金属蛋白酶类 （MMPs）和基质金属蛋白酶组织抑制物（TIMP）。MMPs的明胶酶（MMP-2、MMP-9）主要降解Ⅳ胶原纤维、纤维连接蛋白、肺基膜等成分，由于肺基膜及结构支架的损伤与肺纤维化密切相关，因此，MMPs在肺纤维化发生中的作用日益受到重视[5]。有报道MMP抑制剂巴马司他等能降低MMP-9活性，抑制TNF-α和TGF-β1释放，减轻动物模型的肺纤维化[6-7]。Lemjabbar等[8]测定了肺间质纤维化患者支气管肺泡灌洗液中蛋白和MMP-2 mRNA的表达，显示激素及免疫抑制剂治疗可以降低肺内MMP-2表达。上述研究均表明损伤肺组织可能通过持续性高表达MMPs，使基膜不可逆性损伤断裂，阻碍新生上皮组织重构正常肺泡腔，最终导致肺纤维化。
本实验研究显示，第3天开始模型组和干预组肺内MMP-2、MMP-9的表达均开始增加，模型组和干预组MMP-9在第7天时已经达到高峰，然后干预组快速下降，到第28天时MMP-9水平基本接近正常，模型组在第7天出现MMP-9表达高峰，第14、28天也出现明显的下降，但是28天时MMP-9的水平仍高于对照组。肺纤维化大鼠在造模的第3~14天以肺泡炎的病理改变为主，提示MMP-9可能与早期上皮基底膜损伤有关，参与了细胞外基质和基底膜的降解。干预组的MMP-9明显下降，且在第14天时MMP-9的表达明显低于模型组，推测清肺化痰通络方可能是通过抑制MMP-9表达，从而延缓、减轻早期肺泡炎的发生。模型组和干预组MMP-2在第14天时达到高峰，然后缓慢下降，第28天时，模型组和干预组仍高于对照组。第14、28天时以肺纤维化为主要病变，提示MMP-2则可能在肺泡上皮细胞的再生与肺组织的异常修复中起重要作用。第14、28天MMP-2在干预组的表达低于模型组，且干预组肺纤维化程度比模型组轻，提示清肺化痰通络方通过延缓或者抑制MMP-2表达，达到延缓以及抑制肺纤维化的目的。
综上所述，本实验结果提示，BLMA5诱导的肺纤维化模型在不同时期MMPs的表达不同，早期病变肺组织以MMP-9的增加为主，晚期则以MMP-2增加为主，与有关报道一致[9]。清肺化痰通络方可能通过抑制MMP-9在肺纤维化大鼠肺内的表达，减轻早期的肺泡炎，抑制MMP-2的表达，延缓和抑制后期肺纤维化的发生。 [参考文献]
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（收稿日期：2012 本文编辑：程 铭）
